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地衣芽孢杆菌W10菌株是对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)等多种重要植物病原菌有拮抗作用的生防细菌。培养24h的细菌液和培养滤液有明显的抑菌作用。因此,培养滤液中存在具有抑菌活性的细菌胞外代谢产物。 培养滤液对病菌菌丝形态和生长有明显的破坏与抑制作用。滤液对菌丝形态的破坏作用主要表现为菌丝原生质收缩、菌丝细胞膨大成泡囊状、细胞壁破裂和原生质外渗等,菌丝不能继续生长,甚至完全崩解。滤液处理3h,病菌菌丝细胞开始出现异常;处理7h细胞壁即可破损,甚至细胞死亡。菌丝细胞崩解的时间随培养滤液浓度的增高而缩短。滤液稀释10倍,对菌落直径和菌丝生长量的抑制率为98.59%和68.90%;稀释2倍,对病菌产孢、孢子萌发和芽管生长的抑制率分别为83.64%、33.71%和57.69%。培养滤液随稀释倍数的增加,其抑制作用逐渐下降甚至消失。培养滤液对病菌菌核的产生和萌发同样也有一定影响。滤液稀释2倍时,对菌核形成抑制率为51.06%;滤液处理菌核后25h时,萌发率明显低于对照,但45h时所有处理的菌核萌发率均达100%,这表明培养滤液只能推迟而不能抑制菌核萌发。 培养滤液以30%硫酸铵沉淀,上清没有抑菌活性。沉淀物经透析后得粗蛋白。粗蛋白分别进行SDS-PAGE和IEF-PAGE,均出现两条蛋白带;经Sephadex G-75凝胶柱层析在280nm处有两个吸收峰。峰Ⅰ含量高,对灰葡萄孢有抑菌活性;峰Ⅱ含量低,无抑菌活性。收集峰Ⅰ即为精提蛋白。对精提蛋白进行IEF-PAGE,仅出现一条蛋白带,且与过柱前的主带相似。这表明精提蛋白中只有一种抗菌蛋白组分。以紫外吸收法测得培养滤液中抗菌蛋白浓度为621μg/ml。 经理化测定,地衣芽孢杆菌分泌的胞外抗菌蛋白分子量为46,672Da,等电点为6.71;组分中含糖6.83%,不含脂,存在无α-氨基的脯氨酸或羟脯氨酸;对热(100℃)较稳定,对胰蛋白酶、蛋白酶K、紫外线和氯仿不敏感,pH 6～12间均有抑菌活性作用,但pH6时活性最强。