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柱花草(stylosanthes guianensis)是一种优良的牧草,它具有耐旱、耐热、耐酸瘦贫瘠、高产优质等特点。柱花草用途广泛,它既是优质的牧草,又是果园、橡胶园理想的绿肥和覆盖植物。但柱花草不耐寒性,在亚热带地区生产上常用的高产优质品种难以越冬,冷害问题是柱花草生产和推广应用中的首要问题。本文以亲本(184)和柱花草耐寒突变体(7-1,6-2,4-1-3-8)为材料进行了以下几方面的研究:低温胁迫下对柱花草相对电导率、MDA、抗氧化系统、叶绿素荧光、光合作用以及低温胁迫下相关基因的表达。实验结果如下:
1.在低温条件下,柱花草抗寒突变体和亲本的相对电导率不断增大,MDA含量增加,但柱花草抗寒突变体的相对电导率、MDA含量始终小于亲本。在低温处理8d时,184、7-1、6-2、4-1-3-8的相对电导率则分别达到了82.35%、47.85%、56.54%和57.28%;MDA含量则分别为对照184的86.97%、88.69%和91.17%。表明柱花草抗寒突变体在低温胁迫下受损伤比亲本轻,抗寒性较亲本强。
2.在低温条件下,抗氧化酶(SOD、CAT、APX)和抗氧化物质(AsA、GSH),在低温处理下均呈现先上升后下降的趋势,4d时抗氧化酶和抗氧化物质达到了最大值,柱花草抗寒突变体始终高于亲本。同时,对柱花草突变体7-1和亲本184的Cu/Zn-SOD、CAT2基因进行了表达分析,发现柱花草Cu/Zn-SOD、CAT2基因表达呈现出上调的趋势,7-1的表达要高于亲本的,说明柱花草抗寒突变体抗寒性强与抗氧化系统密切有关。
3.在低温条件下,柱花草净光合速率(Pn),气孔导度(Gs),蒸腾速率(Tr)的下降,柱花草抗寒突变体的光合参数均始终高于对照,下降速度缓慢,表明低温对对照光合作用的损伤更大。同时,低温造成光系统Ⅱ(PSⅡ)活性下降,柱花草抗寒突变体的最大光化学效率(Fv/Fm)、光化学猝灭系数(qP)、非光化学猝灭系数(NPQ)、PSⅡ电子传递量子效率(ΦPSⅡ)均显著性大于其对照,表明抗寒突变体受伤害较亲本184轻。对柱花草突变体7-1和亲本184的叶绿体与光合作用相关基因(PSAD、PSAE、PSAF、PSAH、PSAL、PSAN、CAB、OEEl、OEE2、CP26、CP29、TLP18.3、RBCS、CPI2、GAPDH、GO)进行了表达分析,发现在低温处理过程中上述基因的表达均出现上调的趋势。其中,柱花草抗寒突变体和亲本差异明显的基因有PSAD、PSAE、PSAF、CAB、CP26、CP29、TLP18.3、RBCs、CP12、GAPDH、GO。研究表明,柱花草抗寒突变体通过上调叶绿体与光合作用相关基因的表达,来增强柱花草光合作用的能力。
4.在低温条件下,对柱花草突变体7-1和亲本184蛋白降解相关基因(UBC9)和抗逆相关基因(GLP)的进行了表达分析。发现的UBC9表达比较稳定,7-1的表达要高于亲本184,GLP基因的表达均出现上调的趋势,7-1的表达要高于亲本184,研究表明柱花草抗寒突变体可以通过蛋白降解相关基因(UBC9)和抗逆相关基因(GLP)来清除异常蛋白,提高抗逆性。
总之,柱花草抗寒突变体抗寒性的提高,是多种基因表达的结果,主要是叶绿体和光合作用相关基因,抗氧化酶基因,蛋白降解相关基因和逆境相关基因。