论文部分内容阅读
目的:建立小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)的体外诱导培养方法。观察“三穴五针”法对小鼠过敏性哮喘模型影响及针刺血清对小鼠BMDCs吞噬功能的影响。 方法:用卵蛋白(OVA)致敏和激发建立过敏性小鼠哮喘模型,针刺组选取大椎、风门(双侧)、肺俞(双侧)穴,假针刺组选取环跳穴(双侧)进行预防和治疗,针刺结束后检测呼吸功能,并制备针刺血清。从C57BL/6小鼠双侧胫骨、腓骨分离骨髓前体细胞,用rmGM-CSF、rmIL-4细胞因子诱导分化成未成熟树突状细胞(Dedritic cells,DC),倒置显微镜观察DC的形态,流式细胞术检测DC的特异性表面分子标记CDllc阳性表达率。用小鼠过敏性哮喘模型各组不同浓度剂量(1∶10,1∶100,1∶1000)的血清继续培养DC48h(血清干预阶段,分为两组:加入rmGM-CSF与rmIL-4;不加rmGM-CSF与rmIL-4),然后加入100ng/ml的FITC-dextran反应1h,用流式细胞仪检测不同血清刺激组DC对FITC-dextran的吞噬能力。 结果: 1.过敏性哮喘模型小鼠在OVA激发后2-7min气道阻力明显升高,有统计学差异(P<0.05),在第2min达到最高值。与哮喘模型组比较,针刺治疗组小鼠在3-6min气道阻力显著降低(P<0.05),且效果明显优于假针刺。 2.两批次的DC阳性表达率分别是62.15±3.97%,70.91±1.23%,差异有统计学意义(P=0.003,P<0.05)。血清对DC进行干预后,CD11c阳性表达率较低的DC吞噬阳性率较高。与DC纯度较高的第2批相比,第1批1∶10血清浓度比例的空白血清组和哮喘假针刺组,1∶100血清浓度比例的哮喘针刺组和哮喘假针刺组,1∶1000血清浓度比例的哮喘模型组细胞吞噬阳性率升高,并有统计学差异(P<0.05)。 同等条件下血清干预的DC,在血清干预阶段加入rmGM-CSF、rmIL-4后CD11c阳性表达率为明显高于不加入rmGM-CSF、rmIL-4组,与不加rmGM-CSF、rmIL-4的DC相比,加入rmGM-CSF、rmIL-4后DC的纯度(CD11c阳性率)提高了1.37倍且有统计学意义,加入细胞因子的各组DC吞噬FITC-dextran的能力显著提高(P<0.05) 3.同一组血清不同浓度进行干预后,DC吞噬阳性率存在明显差异。与1∶10浓度比例相比,哮喘针刺组、哮喘假针刺组1∶100,1∶1000浓度比例血清干预时,DC吞噬阳性率明显增高有统计学差异(P<0.05);其中1∶10浓度比例时吞噬阳性率最低,1∶100与1∶1000血清浓度比例比较无统计学差异(P<0.05)。 4.纯度较高时1∶10血清浓度比例,与哮喘模型组相比,哮喘假针刺组血清能明显降低DC吞噬阳性率并有统计学差异(P<0.05),其他批次各组间无统计学差异(P>0.05)。 结论: 1.针刺可显著降低过敏性小鼠哮喘模型气道阻力,具有防治过敏性哮喘的作用。 2.DC的纯度(CD11c阳性表达率)是验证针刺血清对DC吞噬功能影响的关键,而rmGM-CSF与rmIL-4等细胞因子的刺激是影响DC纯度的重要因素之一。 3.不同组别的血清均能够影响DC吞噬能力,且存在一定量效关系。 4.在DC纯度相同的情况下,哮喘假针刺血清组1∶10浓度比例血清对DC吞噬功能有明显影响。其他各组间无明显差异。为了进一步验证针刺血清对DC吞噬能力的影响,需要在今后的研究中优化与DC纯度相关的主要实验参数。