小鼠骨髓来源树突状细胞体外诱导培养及针刺血清对其吞噬功能的影响

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目的:建立小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)的体外诱导培养方法。观察“三穴五针”法对小鼠过敏性哮喘模型影响及针刺血清对小鼠BMDCs吞噬功能的影响。  方法:用卵蛋白(OVA)致敏和激发建立过敏性小鼠哮喘模型,针刺组选取大椎、风门(双侧)、肺俞(双侧)穴,假针刺组选取环跳穴(双侧)进行预防和治疗,针刺结束后检测呼吸功能,并制备针刺血清。从C57BL/6小鼠双侧胫骨、腓骨分离骨髓前体细胞,用rmGM-CSF、rmIL-4细胞因子诱导分化成未成熟树突状细胞(Dedritic cells,DC),倒置显微镜观察DC的形态,流式细胞术检测DC的特异性表面分子标记CDllc阳性表达率。用小鼠过敏性哮喘模型各组不同浓度剂量(1∶10,1∶100,1∶1000)的血清继续培养DC48h(血清干预阶段,分为两组:加入rmGM-CSF与rmIL-4;不加rmGM-CSF与rmIL-4),然后加入100ng/ml的FITC-dextran反应1h,用流式细胞仪检测不同血清刺激组DC对FITC-dextran的吞噬能力。  结果:  1.过敏性哮喘模型小鼠在OVA激发后2-7min气道阻力明显升高,有统计学差异(P<0.05),在第2min达到最高值。与哮喘模型组比较,针刺治疗组小鼠在3-6min气道阻力显著降低(P<0.05),且效果明显优于假针刺。  2.两批次的DC阳性表达率分别是62.15±3.97%,70.91±1.23%,差异有统计学意义(P=0.003,P<0.05)。血清对DC进行干预后,CD11c阳性表达率较低的DC吞噬阳性率较高。与DC纯度较高的第2批相比,第1批1∶10血清浓度比例的空白血清组和哮喘假针刺组,1∶100血清浓度比例的哮喘针刺组和哮喘假针刺组,1∶1000血清浓度比例的哮喘模型组细胞吞噬阳性率升高,并有统计学差异(P<0.05)。  同等条件下血清干预的DC,在血清干预阶段加入rmGM-CSF、rmIL-4后CD11c阳性表达率为明显高于不加入rmGM-CSF、rmIL-4组,与不加rmGM-CSF、rmIL-4的DC相比,加入rmGM-CSF、rmIL-4后DC的纯度(CD11c阳性率)提高了1.37倍且有统计学意义,加入细胞因子的各组DC吞噬FITC-dextran的能力显著提高(P<0.05)  3.同一组血清不同浓度进行干预后,DC吞噬阳性率存在明显差异。与1∶10浓度比例相比,哮喘针刺组、哮喘假针刺组1∶100,1∶1000浓度比例血清干预时,DC吞噬阳性率明显增高有统计学差异(P<0.05);其中1∶10浓度比例时吞噬阳性率最低,1∶100与1∶1000血清浓度比例比较无统计学差异(P<0.05)。  4.纯度较高时1∶10血清浓度比例,与哮喘模型组相比,哮喘假针刺组血清能明显降低DC吞噬阳性率并有统计学差异(P<0.05),其他批次各组间无统计学差异(P>0.05)。  结论:  1.针刺可显著降低过敏性小鼠哮喘模型气道阻力,具有防治过敏性哮喘的作用。  2.DC的纯度(CD11c阳性表达率)是验证针刺血清对DC吞噬功能影响的关键,而rmGM-CSF与rmIL-4等细胞因子的刺激是影响DC纯度的重要因素之一。  3.不同组别的血清均能够影响DC吞噬能力,且存在一定量效关系。  4.在DC纯度相同的情况下,哮喘假针刺血清组1∶10浓度比例血清对DC吞噬功能有明显影响。其他各组间无明显差异。为了进一步验证针刺血清对DC吞噬能力的影响,需要在今后的研究中优化与DC纯度相关的主要实验参数。
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