本研究以G6型牛轮状病毒CHLY株的总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增牛轮状病毒VP4基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pEASY-T3载体中,成功构建出克隆质粒pEASY-T3-VP4。经双酶切后再将该基因重组于原核表达载体pET32a(+)中,构建出原核表达质粒pET32a-VP4。同时,以pET20b-LTB为模板PCR扩增出LTB基因,以同样的方法构建出原核表达质粒pET32a-VP4-LTB。将pET32a-VP4和pET32a-VP4-LTB分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约108.4KD和115KD的融合蛋白带,而未诱导的对照菌株没有出现相应的条带,即成功构建了能够稳定表达VP4蛋白的基因工程菌株。对CHLY株VP4基因进行了核酸序列测定和基因对比,结果表明该病毒株的P血清型为P[1]型。将纯化的VP4融合蛋白和VP4-LTB融合蛋白作为抗原经过肌肉注射免疫小鼠,并以纯化的pET32a的His-tag为对照,免疫7周后VP4融合蛋白和VP4-LTB两个融合蛋白免疫组的血清牛轮状病毒VP4 IgG抗体效价分别为8.1×103和16.3×103 ,经统计学分析,两者没有显著差异(P﹥0.05),而与对照组具有显著差异(P﹤0.05)。免疫母鼠所生小鼠在出生后4天,用107.2TCID50轮状病毒CHLY株100μL进行腹腔攻毒,攻毒后第3～7天对照组小鼠出现了典型的腹泻症状,保护率为0,而经过VP4蛋白免疫的母鼠所生的小鼠保护率为90%,经过VP4-LTB融合蛋白免疫的母鼠所生的小鼠保护率为94%。