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目的： 研究blaNDM-1在阴沟肠杆菌临床分离株中对碳青霉烯类药物耐药中的作用。 方法： 1.对患者资料进行收集和整理以及对碳青霉烯类耐药或敏感性下降的阴沟肠杆菌的筛选:对2012年7月至2013年6月分离自温州医科大学附属第一医院的共102株阴沟肠杆菌，根据菌落形态和革兰染色进行初步的鉴定，再采用Vitek-2全自动微生物分析仪严格按照厂家说明书进行菌种鉴定和药敏试验;采用E-test法对耐药表型进行进一步的测定。 2.对临床分离的对碳青霉烯类耐药或敏感性下降的阴沟肠杆菌耐药基因型进行检测:采用煮沸法提取细菌总DNA，通过聚合酶链反应(PCR)来检测这部分对碳青霉烯类耐药或敏感性下降的阴沟肠杆菌是否携带blaNDM-1，对携带blaNDM-1的阴沟肠杆菌再依次采用CLSI推荐的双纸片法来确定超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的表型，三维试验来进行AmpC酶的表型检测，改良Hodge试验来进行碳青霉烯酶的表型测定，双纸片EDTA协同法来进行金属酶的表型检测以及PCR方法来测定是否携带其它的耐药基因，测定的耐药基因包括其它碳青霉烯酶基因、超广谱β内酰胺酶基因、质粒介导的AmpC酶基因、质粒介导16S rRNA甲基化酶基因和质粒介导的喹诺酮类耐药基因，同时对PCR阳性扩增产物进行DNA测序，所有的DNA序列均利用NCBI的Blast进行比对来确定基因型。 3.耐药基因的转移:以大肠埃希菌EC600作为受体菌，以携带NDM-1基因的阴沟肠杆菌为供体菌进行接合试验，对疑似成功接合的接合子用全自动微生物分析仪Vitek-2进行菌种鉴定，并用PCR和DNA测序测定接合子的耐药基因。使用QIAGEN(Hilden，Germany)质粒中量提取试剂盒来提取转化接合子的质粒DNA，通过电泳来对临床分离菌株和接合子的质粒大小进行测量。 4.MLST序列型的分析:根据阴沟肠杆菌的7个管家基因来对菌株的序列型进行分析。 结果： 1.本研究分离到一株携带NDM-1基因的阴沟肠杆菌，该菌株分离自温州医科大学附属第一医院神经外科1例重度颅脑损伤伴严重吸入性肺炎患者的痰液标本，该患者于2013年3月12日被收治入院，入院后第11天开始出现低热，做痰培养分离出阴沟肠杆菌，被命名为阴沟肠杆菌WZ56。该阴沟肠杆菌WZ56采用E-test法测定MIC值，参照CLSI标准，除了对氨曲南敏感外，对其他β-内酰胺类抗生素均表现为耐药，对左氧氟沙星、庆大霉素、阿米卡星、磷霉素、复方新诺明、多粘菌素E和替加环素均表现为敏感。 2.阴沟肠杆菌WZ56在确定MBLs的双纸片EDTA协同试验为阳性，ESBLs确定试验为阴性，头孢西丁三维试验为阴性，改良Hodge试验为阴性。通过PCR检测和DNA测序发现阴沟肠杆菌WZ56携带blaNDM-1、blaCTX-M-9和qnrA1。接合菌的质粒DNA，经PCR扩增blaNDM-1、blaCTX-M和qnrA1基因，只有blaNDM-1为阳性，未检测到blaCTX-M和qnrA1，表明blaNDM-1为质粒介导，且blaNDM-1与blaCTX-M-9和qnrA1不存在于同一个质粒上。 3.临床分离株的7个管家基因经测序、剪切、比对后证实为新的序列，提交此序列至阴沟肠杆菌MLST数据库被命名为ST84。 结论： 1.blaNDM-1编码的NDM-1型碳青霉烯酶是导致阴沟肠杆菌WZ56对碳青霉烯类药物耐药的原因。 2.在非多重耐药的肠杆菌科细菌临床分离株中出现blaNDM-1，应引起临床注意。