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捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是羊(山羊、绵羊)的主要胃肠道寄生虫之一,常常导致羊特别是羔羊贫血、消瘦、甚至死亡,造成重大经济损失。目前的主要防治方法是使用抗蠕虫药,但由于虫体抗药性的产生和蔓延、药物残留和研制新抗虫药的巨额花费,使得捻转血矛线虫病的免疫预防成为当前的迫切需要。 H11是一种隐蔽抗原,分布于成虫阶段虫体的小肠微绒毛上皮细胞。研究资料表明H11具有良好的免疫保护效果,天然H11具有良好的免疫保护作用,免疫动物后,可使虫卵减少90%,成虫减少70%,是优良的基因工程疫苗候选抗原,国外已在GenBank中注册了该抗原基因的全序列,本实验室利用分子克隆的手段,成功构建了捻转血矛线虫H11抗原的核酸疫苗,并取得了明显的保护效果。IL-2是T细胞分泌的细胞因子之一,具有广泛的生物学功能,不仅可以促进T、B细胞、NK细胞、单核细胞的分裂增殖,还可促进其它细胞因子如干扰素的分泌,增强抗原提呈作用,是调节机体免疫的重要因子。为了进一步提高H11核酸疫苗的保护水平,本研究将山羊白细胞介素2(Interleukin-2)作为基因佐剂与H11DNA疫苗共同免疫动物,以期获得更好的免疫保护效果。本实验主要包括以下几个部分: 核酸疫苗pcDNA4.0-IL-2-H11-1,2,3的构建和鉴定 利用DNA重组技术,将IL-2基因分别串联于H11基因的上游,通过酶切、序列测定等方法鉴定正确后,分别用重组质粒免疫8-10月龄山羊,1周后取注射部位肌肉组织,用RT-PCR,Western-blot方法检测抗原的转录和表达情况。结果显示该H11基因和山羊IL-2基因均能在注射部位肌肉中表达。 核酸疫苗pcDNA4.0-IL-2-H11-1,2,3的免疫保护实验 pcDNA4.0-IL-2-H11-1,2,3和pcDNA4.0-H11-1,2,3分别于0天和14天腿部肌肉免疫山羊,剂量为每一种疫苗100ug,同时设立不免疫不攻虫(阴性对照组)和只攻虫不免疫组(阳性对照组),初免后28天用5,000条捻转血矛线虫三期幼虫攻虫,通过对初免后14、28、31、36、46、56、66天IgG、IgA抗体的检测,发现免疫组比对照组均能产生较高的抗体水平,说明核酸疫苗能够诱导机体产生较强的体液免疫水平;利用流氏细胞仪测定技术,对免疫前、初免后14、28、66天各组CD4+、CD8+T