【摘 要】
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霍乱是由霍乱弧菌引起的一种急性肠道传染病,发展安全、高效的口服活菌苗是预防霍乱流行的有效方法.然而,由于霍乱弧菌的溶原性丝状噬菌体CTXΦ可以携带毒素基因ctxAB在霍乱
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霍乱是由霍乱弧菌引起的一种急性肠道传染病,发展安全、高效的口服活菌苗是预防霍乱流行的有效方法.然而,由于霍乱弧菌的溶原性丝状噬菌体CTXΦ可以携带毒素基因ctxAB在霍乱弧菌间进行水平转移,这就给活菌苗的生物安全性带来了潜在的隐患.IEM108是我们在不产毒的El Tor型霍乱弧菌IEM101中导入ctxB基因和rstR基因构建而成的菌苗候选株,rstR基因介导的噬菌体免疫作用,能有效防止IEM108对El Tor来源CTXΦ的再感染.该实验对菌苗IEM108的生物安全性进行了评价.通过自杀质粒介导的DNA同源重组技术将霍乱菌株N16961染色体上CTXΦ基因组中的ctxAB基因缺失掉,替换以氯霉素抗性基因,对CTXΦ基因组进行遗传标记,筛选得到了重组菌株N-Φc.用丝裂霉素C诱导出具有感染活性的El Tor型CTXΦc噬菌体,再用它对不同霍乱弧菌菌株及菌苗候选株IEM108进行了体内和体外转染实验.利用CTXΦ和兔肠段实验,我们建立了评测CTXΦ对不同霍乱弧菌菌株转染效率的动物体内模型.结果表明,CTXΦc对古典型霍乱弧菌1119的体内转染率高于体外;古典型菌株比El Tor型菌株更易感;对IEM108的体内转染率为3.05×10<-9>,比IEM101低1000倍,并且低于携带CTXΦ基因组的自然El Tor菌株,说明菌苗候选株IEM108具有比自然产毒株还高的抵抗CTXΦ再感染的能力,因此有满意的抵抗CTXΦ感染而重获毒素基因的生物安全性.
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