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马尾松树皮提取物(Pinusmassonianabarkextracts,PMBE)是从野生马尾松树皮中提取的多酚类物质,淡褐色粉末,易溶于水和乙醇,主要活性成分是原花青素,乃一类由单体、寡聚体和多聚体等天然类黄酮组成的混合物。据报道马尾松树皮具有收敛、止血和解毒之功效,可用于类风湿关节炎、高血压和冻疮等疾病的治疗。化学定量显示1mgPMBE约含(271.429±11.283)μg槲皮素当量的总黄酮。
本文首先运用化学比色法对PMBE的生物学性质进行研究。
其次,通过MTT实验考查PMBE对人体8大系统常见癌细胞体外生长的影响。
再次,通过倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜技术以及流式细胞分析技术研究PMBE体外抑制人肝癌BEL-7402和大肠癌LoVo细胞生长的细胞学效应,结果发现PMBE处理过的细胞出现一系列形态学变化:首先变圆皱缩、膜起泡,继而脱壁漂浮,而后可以看到细胞质空泡化包括线粒体、内质网膨胀等,细胞核皱缩、边集或碎裂,最后还可以观察到内含电子云密度类似核染色质的膜被小体出现;流式分析直方图显示细胞周期G1峰的前方出现亚二倍体峰,峰面积随PMBE处理时间的延长而逐渐增大,同时周期分布图显示G1和S期细胞数量逐渐上升,而G2期细胞数量则递减。
最后,通过流式细胞分析、免疫组化和RT-PCR技术对BEL-7402和LoVo细胞中参与PMBE诱导凋亡的相关蛋白和基因进行筛查。结果提示,PMBE可能通过下调CyclinB、D1和E的表达阻滞BEL-7402细胞周期于G1和/或S期;通过激活p53上调p21表达进而抑制CDK活性协同CyclinB、E的表达下调及CyclinD1的表达上调来阻滞LoVo细胞周期于G1和/或S期。