论文部分内容阅读
目的:通过对WHOII-III级胶质瘤组织中异柠檬酸脱氢酶同工酶1(Isocitrate Dehydrogenase IDHl)的正常酶活性及酶蛋白含量的测定来探讨胶质瘤中IDH1基因突变表达的作用机制。方法:56例人脑胶质瘤组织标本取自于2012年7月至2013年12月河北医科大学第二医院神经外科手术标本,病理诊断由医院病理科按WHO脑肿瘤分类分级标准(2007年)进行,其中星形细胞瘤(II级)10例,少突胶质细胞瘤(II级)12例,少突星形细胞瘤(II级)5例,间变型星形胶质细胞瘤(III级)15例,间变形少突胶质细胞瘤(III级)14例。另外取脑外伤开颅术中正常脑组织(额叶及颞叶)5例作为对照。所有肿瘤标本及正常脑组织标本均快速入液氮中-80℃冻存。采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immuno sorbent assay ELISA)方法中的双抗体夹心法检测所有标本组织IDH1正常酶活性。将以上标本为3组:正常脑组织组、II级胶质瘤组和III级胶质瘤组。采用蛋白质印迹法(Western Blot)同时测定3组标本IDH1酶蛋白含量,得出相应标本代表蛋白含量的灰度值,采用SPSS13.0进行统计分析。结果:1酶活性采用ELISA法对实验标本进行酶活性值检测。以正常脑组织组酶活性值范围为标准,将所有肿瘤组织酶活性值分为低活性组和高活性组,数值以均数±标准差表示,结果显示:正常脑组织组(n=5)为80.297±3.357;低活性组(n=35)为48.755±6.837;高活性组(n=21)为132.246±14.887。将以上三组两两比较,均具有统计学意义(P<0.05)。低活性组肿瘤例数为35,约占总肿瘤例数的62.5%。2酶含量采用Western Blot法对标本进行酶蛋白含量测定。数值以均数±标准差表示,正常脑组织组(n=5):0.2609±0.0653, II级胶质瘤(n=27):0.4577±0.8321, III级胶质瘤(n=29):0.7110±0.0774。以上三组两两比较,均具有统计学意义(P<0.05)。3酶活性与酶蛋白含量相关性分析采用Pearson计算相关分析,II级胶质瘤相关系数0.009;III级胶质瘤相关系数0.201;所有II、III级肿瘤相关系数0.071,酶活性大小与酶含量多少相关性不明显。结论:1与正常对照组相比,脑胶质瘤组中IDH1正常酶活性存在明显差异,活性低于正常的占62.5%,高于正常的占37.5%。结果与目前相关亚型胶质瘤研究IDH1基因突变率相当,存在IDH1正常酶活性降低的胶质瘤中可认为含有IDH1基因突变。2与正常对照组相比,胶质瘤组织中IDH1酶蛋白含量明显增高,且所测胶质瘤中,II级肿瘤IDH1酶蛋白含量较III级肿瘤更高。酶蛋白表达与肿瘤级别相关,提示肿瘤的恶性水平在一定程度上影响着IDH1酶蛋白的含量。3胶质瘤组织中,无论IDH1正常酶活性的高低与酶蛋白含量多少并无明显相关联系,提示虽然IDH1变异基因表达降低了IDH1正常酶活性,但并不能确定是IDH1酶蛋白含量的决定性因素,说明肿瘤组织在IDH1基因表达上存在着各方面复杂的调控机制。