目的：近年来，随着人类基因组计划的完成和疾病相关新基因不断克隆，已开始从基因组的整体水平对肿瘤的发病学进行研究。本课题旨在运用抑制性消减杂交技术筛选和鉴定二烯丙基二硫(diallyl disulfide，DADS)诱导人白血病HL-60细胞差异表达的基因，寻找与DADS抗白血病作用相关的基因，探讨DADS诱导人白血病HL-60细胞分化的分子机制。 方法：采用抑制消减杂交技术，筛选DADS处理HL-60细胞后差异表达的相关基因。经过消减杂交和巢式聚合酶链反应扩增，获得富集差异表达的cDNA片段(表达序列标签，EST)，克隆并挑选经PCR鉴定含有插入片段的质粒测序，Genbank数据库同源性比较进行生物信息学分析。 结果：细胞形态学观察发现，与对照组HL-60细胞相比较，DADS处理后HL-60细胞体积变小，胞浆丰富，细胞核变小，染色变淡，总RNA提取和mRNA纯化结果显示，处理前后的HL-60细胞总RNA为28S和18S的清晰无拖尾条带，mRNA为清晰慧尾片状条带。RsaⅠ酶消化产物分析结果显示：未消化的ds cDNA电泳带为0.5—10kb清晰片状条带，消化后的cDNA为0.1—2kb清晰片状条带。接头连接效率检测结果表明：RsaⅠ酶消化产物cDNA与接头连接效率大于25％。 巢式PCR产物分析显示：消减组产物片段明显少于未消减组产物片段，且丰度较低，片段多在100—600bp。消减效率的PCR鉴定表明：与未消减组PCR产物相比，消减组PCR产物中G3PDH基因产物在28个循环之后才出现，且产物量明显减少，说明所构建的消减文库具有很高的消减效率。T／A克隆平板显示：平板白色菌落和蓝色菌落约为2：1。克隆产物的纯化和PCR鉴定结果显示：纯化的阳性克隆质粒大于3kb，PCR产物多为200—300bp片段。