目的:本课题通过动物实验验证电针水沟穴对MCAO大鼠的治疗作用,并观察电针对大鼠神经功能缺损体征评分、缺血半暗带微血管密度改变和缺血后脑组织mir-210和ephrinA3 mRNA转录水平的影响,探讨电针水沟穴治疗对MCAO大鼠脑缺血后促血管新生microRNAs可能调控机制。方法:本实验为随机对照实验,设为空白对照组、假手术组、模型组、治疗组4组。空白对照组不复制模型(大脑中动脉缺血模型,MCAO),假手术组行模型组相同手术,但不插入线栓;模型组和治疗组复制模型,以改良Longa法为标准,治疗组在模型基础上加针刺治疗干预;各组均行抓取固定干预处理。将80只大鼠随机分入各组,每组均20只大鼠。模型和治疗两组,复制模型成功,符合入组标准后,将模型成功大鼠再次随机分入两组。大鼠神经功能缺损体征评价,按Berderson评分标准评分完成。各项干预连续处理3天后,生理盐水、PBS灌注取材。各组大鼠用SBCA法免疫组化染色CD34阳性表达细胞,观察电针水沟穴对MCAO大鼠脑缺血后新生微血管密度影响;运用实时荧光定量PCR技术检测MCAO脑缺血大鼠电针水沟穴后对mir-210的表达和ephrinA3转录水平的影响、Western blot技术检测电针水沟穴对MCAO大鼠脑缺血后ephrinA3蛋白表达量的影响。结果:神经功能缺损体征改变在对照组和假手术组两组均未观察到,评分为0分;模型和电针治疗两组大鼠造模术后均观察到有不同程度神经功能缺损症状出现,并且模型组大鼠神经功能缺损体征较电针治疗组大鼠明显严重;以上数据经统计学单因素方差分析统计结果发现:空白对照与假手术组两组之间无差异,p=1,大于检验水准α=0.05;空白对照组和假手术组分别与模型组和治疗组相比,p=0.0001,小于检验水准α=0.05,差异具有明显的统计学意义;模型组和电针组两组之间比较,p=0.0001,小于检验水准α=0.05,差异同样具有明显的统计学意义。经CD34免疫组化染色,光镜下观察计数新生微血管密度发现:在空白对照和假手术组两组玻片上几乎不见新生微血管;模型和治疗两组玻片均观察到明显CD44~+表达新生微血管内皮细胞的增多,进一步对比发现,电针治疗干预组CD44~+表达的微血管内皮细胞明显多于模型组,且电针治疗组玻片上可观察到较为成型的微血管管腔形成;数据同样行但因素方差分析发现:空白对照与假手术组两组之间无差异,p=1,大于检验水准α=0.05;空白对照组和假手术组分别与模型组和治疗组相比,p=0.0001,小于检验水准α=0.05,差异具有明显的统计学意义;模型组和电针组两组之间比较,p=0.0001,小于检验水准α=0.05,差异同样具有明显的统计学意义。通过对各目的指标检测发现:对照组和假手术组两组的缺氧诱导因子mir-210和ephrinA3 mRNA及其翻译蛋白均未见明显表达;模型组缺氧诱导因子mir-210表达水平上调升高,ephrinA3 mRNA和其蛋白的表达亦上调升高;电针治疗组缺氧诱导因子mir-210表达水平在模型组水平上进一步上调,而ephrinA3 mRNA和其蛋白的表达水平反较模型组的表达下调降低;数据同样行但因素方差分析发现:空白对照与假手术组两组上述三个指标之间无差异,p值均大于检验水准α=0.05(p>0.05);空白对照组和假手术组就上述三个指标分别与模型组和治疗组相比,p值均小于检验水准α=0.05(p<0.05),差异具有统计学意义;模型组和电针组两组之间比较:mir-210指标p=0.027,小于检验水准α=0.05,差异具有统计学意义;ephrinA3 mRNA p=0.01,小于检验水准α=0.05,差异具有统计学意义;ephrinA3 mRNA p=0.013,小于检验水准α=0.05,差异具有统计学意义。结论:电针治疗明显促进MCAO大鼠神经功能损伤的恢复;电针对MCAO大鼠缺血局部的微血管新生有促进作用;电针促进脑缺血大鼠血管新生,可能与电针治疗促进促血管新生指标mir-210过表达,在转录后水平ephrinA3 mRNA翻译蛋白或降解其本身有关。