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肝表达抗菌肽-2(Liver-expressed antimicrobial peptide 2,LEAP-2)和 β-防御素((β-defensin)属于抗菌肽家族成员。在哺乳动物中的研究表明,肝表达抗菌肽-2和β-防御素都具有大量的阳离子,且在机体的先天免疫反应中起着重要作用。本文对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肝表达抗菌肽-2(TroLEAP-2)和β-防御素(TroBD)进行了基因克隆,并对其体内外功能进行了分析研究。结果如下:(1)TroLEAP-2 cDNA编码区长321 bp,编码106个氨基酸,相对分子质量为11.65 kDa。TroLEAP-2成熟肽中包含4个保守的半胱氨酸残基,与其他硬骨鱼的LEAP-2同源性在40.57%～83.02%,其中与鮸鱼同源性最高,为83.02%。系统进化树的结果表明,其与鮸鱼和大黄鱼关系紧密,为一个分支,并同属于鲈形目。组织特异性的结果表明,TroLEAP-2在免疫器官肝脏、脾脏和头肾中的表达量最为丰富。在迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和神经坏死病毒(VNNV)感染后,TroLEAP-2在肝脏、脾脏、头肾中的表达量显著上调。体外实验表明,重组蛋白(rTroLEAP-2)能显著抑制迟缓爱德华氏菌、无乳链球菌的生长。体内实验结果表明,将TroLEAP-2过量或干扰表达后,可显著减少或增加细菌(E.tarda和S.agalactiae)或病毒(VNNV)的感染数量。此外,我们还发现TroLEAP-2能显著提高机体酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶的活性,并且能显著提高头肾巨噬细胞呼吸爆发活性,这些结果表明TroLEAP-2在机体先天免疫中起重要作用。(2)TroBD的cDNA全长为592 bp,其中编码区长为192 bp,由63个氨基酸组成,相对分子质量为7.217 kDa。TroBD成熟肽内包含6个保守半胱氨酸残基,与其他硬骨鱼的β-防御素具较高同源性(27.27～98.41%),其中与鳜鱼的相似度最高,为98.41%。系统进化树的结果表明,其与条石鲷聚为一支,并且同属于鲈形目。组织特异性的结果表明,TroBD在免疫器官头肾和脾脏中的表达量最高。在哈氏弧菌(Vibrio harveyi)和神经坏死病毒感染后,TroBD在头肾和脾脏中的表达量显著上调。体外实验结果表明,重组蛋白(rTroBD)能显著抑制harveyi的生长,且进一步试验证明其抗菌活性受盐浓度的影响。体外实验还发现,TroBD对头肾巨噬细胞有趋化作用。体内实验结果表明,在TroBD过量或干扰表达后,可显著减少或增加V.Zharveyi或VNNV的感染数量。综上所述,这些结果表明TroLEAP-2和TroBD在卵形鲳鲹抗细菌和抗病毒免疫中扮演重要的角色,实验结果将为卵形鲳鲹抗病原免疫提供了新的研究思路。