目的用真核转录载体pSilencer2.0构建针对survivin基因的两种重组干扰载体( psilencer2.0-SVV1、psilencer2.0-SVV2 ),并转染膀胱肿瘤细胞系EJ细胞株,通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,筛选有效抑制suvivin表达的重组干扰载体。并检测其对EJ细胞增殖、细胞周期、凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法将设计、合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接。重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果。MTT法检测对细胞生长增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡的变化,RT-PCR检测对caspase-3、bax及bcl-2基因的表达影响。结果(1)酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体。(2)RT-PCR及免疫印迹实验检测表明: pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调( P < 0.05),pSilencer2.0-SVV2抑制效果更佳。(3)转染后的EJ细胞生长速度明显变慢,处于细胞G2/M期数目增多,凋亡率增强,caspase-3及bcl-2基因表达无明显变化( P > 0.05)、bax表达明显增强( P<0.05)。结论重组质粒psilencer2.0-SVV2转染膀胱癌细胞株后可靶向沉默survivin基因表达,并可促EJ细胞凋亡,改变其生物学行为,在膀胱癌的基因治疗中具有一定的价值。