目的:建立一种运用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测和鉴定常见下呼吸道感染病原菌的方法,以提高临床检测病原菌的速度及准确性。证实其在诊断上的应用价值。方法:1.确定常见下呼吸道感染11种病原菌:肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体;2.通过BLAST、Align X和Primer 5.0程序,对各病原菌菌株的基因保守区进行序列分析,设计并合成本试验所需的引物;3.收集我院诊断为下呼吸道感染的50例患者痰标本;3.提取各标本中病原体DNA;4.将提取的DNA进行环介导等温扩增技术扩增,放入实时荧光定量PCR (Real-Time PCR)仪65℃反应45分钟,行荧光方法检测,测定熔解曲线,进行数据分析;5.对检测体系的灵敏度和特异性进行测试;6.利用该检测方法对50例临床诊断为下呼吸道感染的痰标本进行LAMP法检测,与传统的痰常规细菌培养法进行比较分析。结果:1.病原菌的检测灵敏度均可以达到200copies/25ul反应体系(相当于1.7×104copies/ml痰液);2.每种菌株的引物只与其相应的细菌DNA反应,而与下呼吸道感染常见11种病原菌无交叉反应,表明探针具有较高的特异性;3.LAMP检测的阳性率为82.0%,较常规细菌培养的阳性率高;4.LAMP技术能检测出多数浓度较低的样品细菌或者难培养的细菌。结论:本研究初步建立的下呼吸道感染病原菌LAMP技术能够准确、敏感、快速、高效地检测痰标本中的病原菌,为进一步完善和建立下呼吸道感染病原菌的LAMP基因芯片检测技术打下了基础。