目的：探讨视觉传入障碍对SCN神经元在形态和功能上的影响的病理机制。 　　方法：本实验选用英国皇家外科学院大鼠(Royal College of Surgeons rat,RCS),对RCS大鼠采用玻璃体腔注射伪狂犬病毒,逆行标记视交叉上核神经元的方法：(1)研究RCS大鼠不同病变阶段SCN神经元数量、形态的改变及一些特殊生物标志的变化；1).取实验组和对照组老鼠分别行一侧玻璃体腔注射处理后的伪狂犬病毒PRV(经过重组后带有EGFP基因的PRV)；2.)饲养5天后灌注、取脑组织(包含SCN在内),按照大鼠脑立体定位图谱( Paxinos G, Wstson C. 1986 )行SCN冰冻切片；3.)采用多重荧光标记、激光共聚焦显微镜等方法,观察不同变性阶段的RCS大鼠的SCN神经元数量、形态及一些特殊生物标志的变化；观察SCN神经元细胞形态、树突分支形态改变,不同病变阶段SCN脑组织切片,免疫组化NR1、NR2A、NR2B、GABA等神经递质的表达变化；(2)对不同病变阶段的RCS大鼠的SCN神经元行脑片切片,并行膜片钳记录,研究其电生理功能。1)同上处理实验组及对照组大鼠；2)饲养5天后活体状态下取大脑组织,行振动切片机切片,在荧光显微镜下寻找被PRV逆向标记的SCN神经节细胞,并行全细胞膜片钳技术记录,对SCN神经节细胞进行以下研究：a)记录SCN神经节细胞膜学特性：静息膜电位、输入阻抗,以及神经节细胞的主动膜学特性；b) 给予光或电刺激记录突触后电流(PSC),研究RCS大鼠不同病变阶段SCN神经节细胞与RGCs以及水平细胞、无长突细胞之间有无突触联系；c) 对未标记的RGCs行膜片钳全细胞记录,记录膜学特性,同前；d) 结合神经药理学方法分离出PSC中的兴奋性(主要是谷氨酸介导)和抑制性(主要是GABA介导)电流成分：灌流液(ACSF)内使用GABA受体拮抗剂荷包牡丹碱(BMI；20μM),以分离PSC 中谷氨酸受体介导的的兴奋性电流成分(EPSCs)；同时加入BMI (20μM)和non-NMDA 受体(主要是AMPA受体)阻断剂6-氰基-7-硝基喹啉-2,3-二酮(CNQX；20μM),分离出NMDA 受体介导的EPSCs (NMDA-EPSCs)；然后在ACSF中同时加入NMDA受体阻断剂—D,L-2-氨基-5-磷酸基戊酸(AP-5；50μM) 和CNQX(20μM),分离出GABA 受体介导的抑制性突触后电流(IPSCs) (GABA-IPSCs) ,并计算NMDA 受体介导的EPSCs和GABA受体介导的IPSCs的比率。 　　结果：(1) 原发性PRV152病毒感染注射眼的视网膜神经节细胞,在几个视网膜信号接收核团产生跨突触标记,包括在SCN和IGL。(2) 在注射病毒后较长的时间间隔里(116-120h),注射眼对侧的视网膜上的视网膜神经节细胞也通过接收双边视网膜信号输入的受感染的视网膜接收核团的逆行传输而被标记。(3) 如眼内注射PRV,公认的涉及自主神经调节的神经元也被感染。(4) 被PRV感染的SCN神经元的静息膜电 位(42±6mv)和输入电阻(582±91 MV)和那些没有被感染的RCS大鼠的SCN神经元的静息膜电位和输入电阻类似(48±2毫伏；672±61 MV,n=20,P> 0.05)。(5) PRV注射的动物在视神经刺激中类似的表现出兴奋性突触后电流的是在6个被标记的神经元发现了5个(83%),而未被标记的3个中只发现了1个(33%),2个未命名的细胞中发现了一个(50%)。诱发的兴奋性突触后电流有一个发布刺激的潜伏期为7-10ms,和幅度从213至223pA的近250mv的钳制电压,以及单指数衰减时间(t 53.7-5.0ms)。(6) 所有的SCN神经元在电压钳钳制电位为正到250mv的时候都可以观察到自发的抑制性突触后电流,包括6个被PRV感染的SCN神经元以及从未被感染的对照组动物中随机选择的6个SCN神经元,而这两组的自发性抑制性突触后电流的频率无明显差异(19±7Hz,对照组；25±5Hz,感染组；P>0.5)。(7) 被PRV感染的SCN神经元的抑制输入在数量和质量上均可媲美未被PRV感染动物的相关神经元。对照组SCN神经元的自发性兴奋性突触后电流的平均频率为2.7±1.1Hz(范围0.3-6Hz),而感染PRV组的SCN神经元的自发性兴奋性突触后电流的平均频率为2.4±0.7Hz(范围0.3-4Hz),二者之间的差异无明显统计学意义(P>0.5)。(8) 表达EGFP的视网膜神经节细胞可以直观的从被感染的视网膜接收核团逆行标记的对侧视网膜的RGC层被观察到。静息膜电位为-52±6mv,输入电阻为297±26MΩ。 　　结论：视觉传入障碍对大鼠的SCN神经元在形态和功能方面并未造成明显的影响