论文部分内容阅读
目的：研究蛇葡萄素(AMP)体外对人膀胱癌J82细胞株的抑制作用及作用机制。方法：1.体外传代培养人膀胱癌J82细胞株,MTT比色法测定AMP单次作用于J82细胞48h、72h对细胞增殖的影响。2.流式细胞术Annexin V/PI双染法,检测AMP单次作用于J82细胞48h,对细胞凋亡的影响。3.透射电镜观察AMP单次作用于J82细胞48h,细胞形态的变化,以及是否产生凋亡小体。4. Western-blot法检测细胞凋亡蛋白p-Bcl-2、p-Bad的表达量。结果：1.MTT比色法结果：AMP单次作用于J82细胞48h,能够显著抑制J82细胞的增殖。与阴性组相比较,AMP44.47μg/ml组差别有显著性(P<0.05),50.04～70μg/ml组差别有极显著性(P<0.01),IC50值为57.16±1.86μg/ml。AMP单次作用于J82细胞72h,对J82的增殖具有显著的抑制作用,与阴性组相比较,AMP40～70μg/ml组差别具有极显著性(P<0.01),IC50值为45.00+3.54μg/ml。顺铂(DDP)单次作用于J82细胞48h、72h,均能够显著抑制J82细胞的生长。与阴性组相比较,DDP0.25～8μg/ml组差别具有极显著性(P<0.01),IC50值分别为5.2±0.77μg/ml、0.8±0.18μg/ml。 AMP48h给药组与72h给药组相比,72h给药组对J82细胞的抑制率高于48h给药组,IC50值差别有极显著性(P<0.01)。2.流式细胞术Annexin V-PI双染法检测结果：AMP各浓度组和DDP组均能够显著诱导J82细胞凋亡。与阴性组比较,AMP40、50.04μg/ml单次作用于J82细胞48h后,差别具有极显著性(P<0.01); AMP40、62.59μg/ml组能够显著诱导J82细胞晚期凋亡,与阴性组比较,AMP40μg/ml组差别具有显著性(P<0.05),AMP62.59μg/ml组差别具有极显著性(P<0.01); DDP2μg/ml能够诱导J82细胞早期凋亡,与阴性组比较,其差别具有极显著性(P<0.01)。3.透射电镜观察结果：与阴性组比较,AMP40μg/ml、DDP2μg/ml单次作用于J82细胞48h后,凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。细胞核内染色质高度盘绕,出现空泡结构,细胞核出现碎裂溶解现象。核膜模糊不清,细胞破碎,并出现大量凋亡小体。4. Western-blot法检测结果：AMP62.59μg/ml组单次作用48h、AMP70μg/ml组单次作用24h、48h,能够下调细胞凋亡蛋白p-Bcl-2的表达。与阴性组比较,AMP62.59μg/ml、AMP70μg/ml24h组,差别具有显著性(P<0.05),AMP70μg/ml48h组,差别有极显著性(P<0.01)。AMP70μg/ml组单次作用24h、48h组能够下调细胞凋亡蛋白p-Bad的表达。与阴性组比较,AMP70μg/ml24h组,差别具有显著性(P<0.05),AMP70μg/ml48h组,差别具有极显著性(P<0.01)。结论：1.AMP能高效抑制人膀胱癌J82细胞株的生长,抑制作具有明显的浓度和时间依赖性。2.AMP能够显著诱导人膀胱癌J82细胞株凋亡,其诱导机制可能与下调细胞凋亡蛋白p-Bcl-2、p-Bad有关。