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【目的】 观察在不同浓度的荷叶生物碱作用下,人主动脉内皮细胞( HAECs )中SDF-1/CXCR-4蛋白及mRNA表达情况及其血管形成功能的变化,初步探讨荷叶生物碱对SDF-1/CXCR4的影响,从中寻找出荷叶生物碱对其作用的最适有效浓度。 【方法】 1 .人主动脉内皮细胞(HAECs)的培养及设置不同浓度荷叶生物碱刺激条件。 2.不同浓度梯度荷叶生物碱分别作用于 HAECs24h 后,通过 RT-QPCR 和Western-blot技术分别检测各组细胞中SDF-1/CXCR4 mRNA及其蛋白的表达情况。 3.采用体外内皮细胞小管形成实验观察不同荷叶生物碱浓度对HAECs血管新生能力变化的影响。 【结果】 1. 据前期研究实验结果,设置实验中荷叶生物碱的浓度梯度为:0mg/L、10mg/L 、20mg/L 、50mg/L 、100mg/L。 2. RT-QPCR 结果显示:(10—100mg/L)荷叶生物碱实验组中,SDF-1 mRNA的表达均较对照组(即 0mg/L 组)增加(P<0.05),其中,50mg/L和 100mg/L实验组 SDF-1 mRNA 的相对表达量均显著高于对照组( P<0.01)。 3. Western-blot 结果显示:在( 10—100mg/L )荷叶生物碱实验组中, SDF-1/CXCR4 蛋白表达均较对照组增加,其中,50mg/L 和100mg/L荷叶生物碱实验组的 SDF-1/CXCR4蛋白表达量较对照组显著增加(P<0.01)。 4. 体外小管形成实验结果显示: 10mg/L、20mg/L、50mg/L 、100mg/L荷叶生物碱实验组 HAECs 体外小管形成能力与荷叶生物碱呈浓度依赖性的增强,50mg/L 和 100mg/L 组 HAECs 体外小管形成的能力较对照组显著增强, 以 50mg/L 最明显。 【结论】 1. 荷叶生物碱(100mg/L浓度以下)增加HAECs中SDF-1/CXCR4 mRNA和蛋白的表达,当浓度为50mg/L和100mg/L时,SDF-1/CXCR4的表达增加最明显。 2. 荷叶生物碱(100mg/L浓度以下)促进HAECs血管新生的能力,浓度为50mg/L 时其血管新生能力增强最明显。其可能是通过增加 SDF-1/CXCR4 mRNA及其蛋白的表达从而促进血管新生。 3. 本实验中,荷叶生物碱促进HAECs中SDF-1/CXCR4基因表达和血管新生功能的最适有效浓度为:50mg/L。