目的:开发一种快速、稳定的离线多维色谱分离纯化方法,用于神经节苷脂的单体制备,开展神经节苷脂类物质的质谱解析规律研究,为神经节苷脂的结构解析奠定基础。方法:在单体的分离纯化方面,以实验室自主研发的X5H色谱柱,采用不同极性的溶剂进行洗脱,实现了按照唾液酸数量的不同依次分级分离的效果,最终获得了GA(去唾液酸神经节苷脂)、GM(单唾液酸神经节苷脂)、GD(双唾液酸神经节苷脂)、GT(三唾液酸神经节苷脂)、GQ(四唾液酸神经节苷脂)等一维产物。对分级分离获得的一维产物采用自制的C8HC反相色谱填料进行二维纯化,最终获得了一系列的神经节苷脂单体。在单体结构表征方面,利用神经节苷脂的对照品,总结出神经节苷脂二级质谱断裂规律,并将其应用到制备的单体化合物中开展了结构解析工作;在神经节苷脂糖链母核鉴定方面,首先通过化学降解方法去掉脂链结构获得糖链结构,而后采用酶解方式除去糖链结构中的唾液酸获得糖链母核结构,通过与不同的糖链母核对照品色谱及质谱的比对,对单唾液酸神经节苷脂的组成及含量进行深度分析。结果:采用离线二维色谱分离纯化的方法,最终获得了28个神经节苷脂单体。利用对照品总结了质谱断裂规律,并依据此规律对获得的单体开展了结构解析工作。在神经节苷脂糖链母核鉴定中,通过与不同的糖型结构对照品比对,发现在GM1糖链母核中存在两种不同的糖型结构(Ganglio型和Neolacto型),其比例为98.2:1.8。结论:本论文针对神经节苷脂分离纯化和结构鉴定的难点问题,设计并应用多维色谱方法制备了神经节苷脂化合物,利用质谱方法对单体结构和糖链母核开展深入分析。本论文实验结果为神经节苷脂的纯化和结构表征提供了新的思路和手段,对神经节苷脂的物质基础研究具有重要的意义。