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目的:新生儿缺氧缺血脑病是新生儿期危害最大的常见病,其病死率致残率非常高,是危害新生儿健康的主要疾病。已成为我国新生儿疾病研究的热点,该病基本病理改变是脑水肿和脑细胞坏死。脑水肿是由于脑内ATP的产生明显减少,脑内的氧化代谢受损,大量神经元坏死钠泵运转障碍,引起细胞内水肿。水通道蛋白(AQPs)是近年来发现的一组与水通透有关的细胞膜转运蛋白,有研究显示水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)在成熟脑中的含量最高,对脑组织水的转运和平衡调节发挥重要作用,与脑水肿关系密切。但它在新生动物缺氧缺血脑损伤中的作用还不清楚。本实验通过western blot方法及Real time PCR方法检测新生大鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischernic brain damage,HIBD)后脑组织AQP-4表达情况。探讨AQP-4在HIBD脑水肿形成机制中的作用,为临床治疗HIBD提供实验和理论依据,揭示新生儿缺氧缺血脑病的发病机制,以期指导缺氧缺血脑病的早期治疗。
方法:将健康7日龄SD新生大鼠(由哈尔滨医科大学附属二院动物中心提供)共80只(体重在12g至18g之间),随机分为2组:对照组40只、HIBD模型组40只,两组分别建模。HIBD动物模型的建立:新生大鼠分离左侧颈总动脉,并结扎,置鼠于常氧空气中30 min后,置低氧舱3 h建模成功(低氧舱含流量为2了/min的92%N2与8%O2混合气、环境温度为37℃、湿度为85%)。建模成功后复氧。对照组仅分离左侧颈总动脉,不予颈总动脉结扎和缺氧。手术后3.5h模型制成。两组均在模型制成后6 h,24 h,48 h和72 h分别处死动物(各时间点动物10只),断头取新生大鼠左脑,置于液氮中保存。通过western blot方法及Real time PCR方法检测新生大鼠脑组织AQP-4表达情况。
结果:本实验结果新生大鼠脑组织AQP-4蛋白及mRNA表达具有一致性。相同时间点HIBD组与正常组相比较差异具有显著性;不同时间点HIBD组相比较差异具有显著性;不同时间点对照组相比较差异无显著性。即从6h开始HIBD组AQP-4表达较正常组增加,24小时达高峰,48h开始下降但仍高于正常对照组,至72h降至最低,且低于对照组。HIBD组AQP-4的动态表达趋势与新生儿缺氧缺血脑病时脑水肿的变化趋势具有一致性,说明我们建模是成功的。同时说明,AQP-4与脑水肿的形成具有相关性,有望成为治疗新生儿缺氧缺血脑病的新靶点。