视黄醇结合蛋白构效关系及其相互作用蛋白的研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woyaoxiazai88
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视黄醇结合蛋白(Retinol-binding protein,RBP)是体内维生素A的运载蛋白,以高度特异性和可调控的方式转运视黄醇,以满足个体生长发育,视觉维护和细胞分化等生命活动需要.是临床上评价营养不良,维生素A缺乏,甲状腺功能亢进,肾功能障碍和肝脏疾患早期诊断的灵敏指标.视黄醇结合蛋白作为脂肪酸结合蛋白的家族成员.是研究疏水小分子结合蛋白结构的模型分子.同时,RBP在实现视黄醇转运功能过程中,涉及到一系列分子间相互作用.而且一些疾病变化也会引起体内RBP的变化.因此,寻找与RBP有相互作用的蛋白质,有可能为视黄醇转运吸收机制的阐明和与之相关疾病的发生.发展机制的了解提供线索.根据RBP,holoRBP和apoRBP以及与视黄醇衍生物的晶体结构及其构象变化.初步推测:构成RBPβ折叠桶开口端的三段发夹结构AB31-33,CD63-67和EF92-98,由于其构象的高度可变性和柔韧性.可能对视黄醇的结合与解离起调节作用.利用酵母双杂交,以人肾脏cDNA预转库和pGBKT<,7>-RBP构建的杂合诱饵蛋白融合筛库,寻找与RBP有相互作用的蛋白质,经过融合筛库,X-a-gal筛选和转化测序以及序列同源比较和ORF的完整阅读框架分析以后,初步筛选出三个与视黄醇结合蛋白有相互作用的蛋白质,即与人肝癌有关的相关抗原59,前列腺癌诱因蛋白PTI-1和一个未知蛋白,目前已经克隆了这三个蛋白质的全长序列.这为进行体内免疫共沉淀与体外的pull-down验证实验以及更深入的研究维生素A的吸收,转运,代谢作用机制和与RBP相关的疾病奠定了基础.
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