盐地碱蓬悬浮培养及脯氨酸含量变化的研究

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为了利用植物悬浮细胞培养工业化生产脯氨酸,本论文以盐地碱蓬为研究对象,应用单因素试验和主要因子的正交试验等方法对盐地碱蓬的愈伤组织诱导、悬浮体系建立和细胞悬浮培养基和培养条件优化等方面进行了研究。获得的主要研究结果如下:(1)采用不同的基本培养基和激素组合在光照和黑暗两种培养条件下对愈伤组织的生长状况和增重情况进行考察,确定①号培养基(MS基本培养基+2,4-D2mg/L+6-BA 1mg/L)在光照条件下最适合盐地碱蓬愈伤组织的培养。以子叶为外植体诱导愈伤组织,诱导率在70%以上。(2)建立了盐地碱蓬悬浮细胞体系,确立最佳的接种时间为5-10天和继代时间为12天。(3)对碱蓬的悬浮培养基和培养条件的优化,经验证实验表明,培养液的脯氨酸含量达到了1074.50μg/mL。培养基与培养条件为:MS培养基添加激素2,4-D2mg/L+6-BA 1mg/L,接种量为25%,添加碳源和氮源分别为山梨醇和硝酸钾,摇床转速和培养温度分别为120r/min和25℃,自然光照下培养。(4)在盐地碱蓬细胞培养时,添加NaCl作为诱导子,结果表明NaCl浓度为2.0%(w/v)时脯氨酸含量最高,500mL摇瓶的培养基脯氨酸含量为2516.32μg/mL,是对照组的2.8倍。本文通过对子叶愈伤组织的诱导和继代培养,获得了松散型愈伤组织以及细胞悬浮培养基、培养条件的优化结果,为盐地碱蓬细胞培养生产脯氨酸提供了基本试验参数。
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