第一部分APC突变导致Gardner综合征的分子遗传分析背景:Gardner综合征是家族性腺瘤性息肉病（FAP）的一个亚型,用于指代FAP的表型变异,即伴有额外的结肠外症状。Gardner综合征导致的结肠内外症状,包括牙齿异常、骨瘤、胃肠息肉,结直肠癌等。Gardner综合征的致病机制是肿瘤抑制基因APC的突变。本研究目的是分析一个汉族Gardner综合征家系中APC基因的突变及其发病机制。材料和方法:先证者,男,38岁,根据其临床症状诊断为Gardner综合征。采集家族成员的外周血,提取基因组DNA。通过PCR扩增和Sanger测序进行APC基因序列分析。通过实时荧光定量PCR和氨基酸保守性分析探讨APC突变的发病机制。进行单倍体基因型分析以鉴定突变的遗传来源。结果:外周血白细胞基因组DNA的APC突变筛查中,先证者和他的儿子都检测到APCc.4621C＞T的杂合突变,但先证者有临床症状的母亲未发现该突变。该突变是无义突变,能导致截断蛋白的产生。APC mRNA表达分析证实患者血液中mRNA表达量相比正常对照下降了一半,且APC mRNA表达量受年龄的影响。氨基酸保守性分析证实突变位点呈高度保守性。单倍体基因型分析表明该突变所在的DNA单链来源于母亲。结论:APC c.4621C＞T无义突变是导致Gardner综合征的致病原因。先证者的APC c.4621C＞T突变很可能遗传自他患有临床症状的母亲,而不是先证者自发突变的结果。他的母亲可能是携带该突变的嵌合体。本案例说明,在Gardner综合征病例的基因诊断中,当先证者疑似自发突变时,有必要验证性腺嵌合的可能性。验证突变的起源有助于深入研究Gardner综合征的发病机制。第二部分δβ融合基因导致地中海贫血的分子遗传分析背景:在中国南方,β-地中海贫血的基因型93%以上是点突变和几个bp片段的插入或缺失。由于极少量β-地中海贫血是由于大片段缺失造成的。所以常规的临床检测通常只针对常见的17种β点突变基因型。因此,它有时会导致误诊。本研究在一个中国家庭发现了一个罕见的在β珠蛋白基因簇上存在7416个bp片段缺失的基因型。该基因型在临床常规检测中被漏诊。材料与方法:我们的研究对象是一个六口之家的中国家庭。通过Gap-PCR技术检测排除了常见α地中海贫血缺失基因型和β地中海贫血缺失基因型。RDB技术和测序分析排除了常见的α-地中海贫血点突变基因型和β-地中海贫血点突变基因型。复查中采用MLPA法检测β珠蛋白基因簇上大片段缺失的存在。用Gap-PCR法和测序法测定缺失的断裂点,确定了缺失的精确位置。通过mRNA测序,检测融合基因的表达。结果:缺失的精确位置是从β-globin基因簇坐标63625号碱基至71040号碱基之间的（NG000007.3）,共有7416个核苷酸的丢失,包括HBD（δ）的第三号外显子以及HBB（β）的启动子区以及第一号和第二号外显子区,形成HBD与HBB的融合基因（Hb Lepore）。先证者的基因型是一个双重杂合子,含有βCD17（HBB:c.52A＞T）基因突变和Hb Lepore。先证者表现了重型β-地中海的主要临床表型。先证者父亲被检测出携带βCD17突变。先证者母亲是Hb Lepore的携带者,临床表型是轻度地中海贫血,有明显的小细胞低色素症。cDNA测序验证了 Hb Lepore融合基因在先证者及其母亲的血液中均有表达。结论:我们采用的检测策略也是成功的,通过MLPA和gap-PCR成功确定了缺失的存在并验证了断裂点的精确位置,确定为Hb Lepore。提示了临床上要注意避免罕见Hb Lepore的漏诊。本实验首次在中国报道了 δβ-珠蛋白融合基因Hb Lepore的具体缺失位点,缺失范围为7416bp,丰富了地中海贫血基因库。本实验验证了 Hb Lepore融合基因在血液中表达,探讨了 Hb Lepore是同源染色体不等交换的结果。论证了 Hb Lepore的存在降低了 β-珠蛋白肽链的表达,导致δβ-地中海贫血表型。