多药耐药细菌的不断出现对人类健康构成了严重威胁,是引起临床上死亡的主要原因。因此,研发新的作用机制的抗生素成为新的热点。抗菌肽是生物体内由特定基因编码产生的一类具有生物活性作用的多肽,是机体固有免疫系统的重要成员,具有抗菌谱广,对哺乳动物细胞无细胞毒性等优点。抗菌肽独特的杀菌机理使微生物不易产生耐药性的特性使其成为抗多药耐药细菌的最有应用前景的新型抗生素。Chensinin-1b是中国林蛙皮肤抗菌肽chensinin-1的改造肽,带有10个正电荷,是阳离子抗菌肽,其二级结构呈现特殊的非典型的任意伸展结构。前期研究发现chensinin-1b具有广谱抗菌活性,可以杀灭多种革兰氏阳性和阴性细菌,但对人体正常细胞无害。本论文选取从临床上分离的多药耐药铜绿假单胞菌0108(MRPA0108)为研究对象,研究chensinin-1b对多药耐药菌的抗菌活性,并通过对抗菌活性和作用机制的研究,为抗菌肽抗多药耐药病原体的感染提供了理论基础。杀菌活性测定结果表明:抗菌肽chensinin-1b能够杀死多药耐药铜绿假单胞菌MRPA0108,MIC值是25μM,但抗菌活性比敏感铜绿假单胞菌低16倍。细胞内膜通透性实验结果显示chensinin-1b的作用靶点仍旧是细胞质膜,chensinin-1b能够增加MRPA0108的膜电位,使细胞膜通透性增加,内容物外泄,细菌死亡。我们发现MRPA0108的外膜是影响chensinin-1b活性的主要原因,chensinin-1b对MRPA0108外膜通透性改变很小,但能明显增加敏感铜绿假单胞菌外膜通透性。进一步地,当去掉MRPA0108的细胞壁,chensinin-1b对MRPA0108原生质体的抗菌活性明显增加,MIC值3.13μM,活性增加了8倍,接近对敏感铜绿假单胞菌的抗菌活性。等温滴定量热法(ITC)实验证实和敏感株相比,抗菌肽chensinin-1b与MRPA0108 LPS之间相互作用能力较弱,由此说明外膜的主要成分脂多糖(LPS)在耐药性方面起到了一定的作用。通过抗菌肽chensinin-1b与细菌生物膜相关实验,我们发现抗菌肽chensinin-1b能够抑制细菌生物膜的形成也能分解已经形成的生物膜,并且对敏感铜绿假单胞菌的作用效果更好,在相同条件下耐药铜绿假单胞菌在生物膜形成数量上更有优势。用激光共聚焦显微镜观察也直观地向我们证明了耐药铜绿假单胞菌生物膜较厚,结构更为致密,抗菌肽对其分解能力更弱。我们还发现耐药铜绿假单胞菌的生物膜组分多糖psl、pel含量较多,由此可见生物膜也是引起细菌产生耐药性主要原因之一。