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背景：牙周炎是一种慢性感染性疾病，其发生发展涉及一系列的免疫炎症反应。巨噬细胞虽然在免疫炎症反应中起了重要作用，但在组织破坏和骨吸收中也起到了不可忽视的作用，同时也在组织修复与重建中扮演重要角色，这一现象与巨噬细胞的极化状态密切相关。巨噬细胞在不同微环境的诱导下，可被极化为M1和M2型巨噬细胞，M1和M2型巨噬细胞分别发挥不同的促炎和抗炎作用。M1型巨噬细胞的主要特征为IL-12、IL-23、NO的高表达与IL-10的低表达；M2型巨噬细胞的主要特征为IL-12、IL-23、NO的低表达与IL-10、Arg-1的高表达。牙龈卟啉单胞菌是牙周炎重要的致病菌之一，与牙周炎的发生、发展密切相关。该菌具有一系列逃避宿主防御机制及破坏宿主组织的毒力因子，包括牙龈素（gingipains）、脂多糖、菌毛和荚膜，他们影响组织细胞多种炎性介质的表达。目前文献对于LPS诱导巨噬细胞极化方面研究甚多，但关于牙龈素对于巨噬细胞极化方面的研究未见相关报道。因此本实验尝试在体外将LPS与牙龈素分别或共同作用于小鼠巨噬细胞后，研究其对巨噬细胞的极化影响，以期在巨噬细胞极化这一新角度，探索牙周炎治疗的新靶点。方法：1.牙龈素的制备：丙酮沉淀P.g ATCC33277菌培养物上清，经重悬、透析提取牙龈素，以BAPNA为底物测定牙龈素活性，以10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)鉴定提取牙龈素纯度及分子量。2.实验分组：实验共分为5组：第一组：巨噬细胞单独培养组（空白对照组）；第二组：LPS（1μg/ml）与巨噬细胞共培养组；第三组：牙龈素（4U/L）与巨噬细胞共培养组；第四组：LPS（1μg/ml）、牙龈素（4U/L）与巨噬细胞共培养组；第五组：LPS（1μg/ml）、牙龈素（4U/L）、C5aRA(C5a受体拮抗剂，1mmol/L)与巨噬细胞共培养组。3.巨噬细胞极化表型标志的检测：上述各组细胞培养24h后，通过Realtime-PCR和ELISA方法检测巨噬细胞极化表型标志IL-10、IL-12、IL-23、NO在基因和蛋白水平的表达。结果:1.P.g ATCC33277牙龈素提取物经10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出单一50kDa蛋白条带，主要为Rgp，底物发色法测定提取物活性值为16.70U／L。2.Realtime-PCR和ELISA结果显示，LPS组IL-12、IL-23、NO表达较空白对照组明显增加（P＜0.05），LPS+牙龈素组IL-12、IL-23、NO表达较LPS组明显降低（P＜0.05），LPS+牙龈素+C5a受体拮抗剂组IL-12、IL-23、NO表达较LPS+牙龈素组明显增高（P＜0.05），各组IL-10的表达变化并没有统计学意义（P＞0.05）。结论：1.丙酮沉淀法可提取分子量50kDa Rgp；2.在体外LPS可诱导巨噬细胞的M1表型极化；3.牙龈素可抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1表型极化；4.牙龈素通过C5a途径抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1表型极化。