【摘 要】
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粪肠球菌感染导致雏鸡死亡及成鸡关节病变,产蛋率下降,给养殖业及人类生命健康带来潜在隐患。抗生素仍是对抗细菌感染的首选,抗生素的应用诱导粪肠球菌形成耐药性,特别是抗万古霉素超级粪肠球菌的出现,引起全球公共卫生领域普遍关注。噬菌体是侵染细菌的主要病毒,具有分布广泛、易于分离、对宿主的专一性强、繁殖力强、稳定性高等优点,因此,分离粪肠球菌噬菌体,分析其生物学特性,对替代抗生素应用于防治粪肠球菌病具有重要
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粪肠球菌感染导致雏鸡死亡及成鸡关节病变,产蛋率下降,给养殖业及人类生命健康带来潜在隐患。抗生素仍是对抗细菌感染的首选,抗生素的应用诱导粪肠球菌形成耐药性,特别是抗万古霉素超级粪肠球菌的出现,引起全球公共卫生领域普遍关注。噬菌体是侵染细菌的主要病毒,具有分布广泛、易于分离、对宿主的专一性强、繁殖力强、稳定性高等优点,因此,分离粪肠球菌噬菌体,分析其生物学特性,对替代抗生素应用于防治粪肠球菌病具有重要意义。为分离裂解鸡源粪肠球菌的噬菌体,以双层琼脂平板法分离培养纯化噬菌体,检测效价和最佳感染复数,绘制一步生长曲线,测定环境温度、紫外幅射、p H值等对噬菌体活性的影响,以点斑法测定宿主谱。本研究在污水中分离纯化出了一株裂解性鸡源粪肠球菌噬菌体（EFC1）,经双层琼脂平板培养后获得边界明显,斑体透明的噬斑,噬菌体效价为6×10~8 PFU/m L,最佳感染复数为1,潜伏期为90 min,爆发期为20 min,裂解量为9 PFU。噬菌体EFC1特异性裂解多株鸡源粪肠球菌,热稳定性较好,不耐受高于50℃的环境温度,对紫外线照射敏感,p H适应范围广（4～12）。噬菌体EFC1生物学特性为临床应用提供试验基础。为探索噬菌体EFC1基因组学特点,纯化浓缩并提取核酸,利用高通量测序组装分析其全基因组序列,预测注释其编码基因。负染法电镜观察噬菌体,噬菌体形态特征属于尾噬菌体目长尾噬菌体科。噬菌体基因组为环状双链DNA,全长56099bp,G+C比例为39.96%,与肠球菌噬菌体v B＿Efa S＿IME198同源性最高,为96.66%。全基因组预测有89个编码基因和2个t RNA编码片段,经NCBI Blastp比对注释,其中27个编码蛋白质为已知功能,包括噬菌体内含子、结构、转录、包装、复制、修饰和裂解,其余为假定蛋白质,未发现携带细菌毒力及抗生素耐药相关基因。噬菌体EFC1为新发现的裂解性噬菌体。这些结果初步注释粪肠球菌噬菌体基因功能,为进一步研究提供基础。为验证噬菌体对抗粪肠球菌感染的潜力,利用鸡胚致死性试验测定粪肠球菌半数致死量,9日龄鸡胚60枚,随机分成6组（每组10枚）,预防组（先接种噬菌体后接种粪肠球菌）、杀灭组（接种粪肠球菌与噬菌体）、治疗组（先接种粪肠球菌后接种噬菌体）、阳性对照（接种粪肠球菌）、阴性对照组（接种BHI肉汤）和噬菌体组（接种噬菌体）,接种后观察7天测定各组鸡胚死亡率。结果鸡胚半数致死量为9.063 CFU/m L,在抗粪肠球菌感染试验中,杀灭组、预防组和治疗组能明显降低鸡胚的死亡率,其死亡率分别为40%、50%和33%,而阳性对照死亡率为87.5%,与杀灭组、预防组和治疗组相比差异显著（P＜0.05）,阴性对照和噬菌体组没有鸡胚死亡。这提示噬菌体EFC1对鸡胚无明显毒副作用,具有明显抗鸡胚粪肠球菌感染作用,对鸡源粪肠球菌的生长具有一定抑杀作用,有望替代抗生素对抗粪肠球菌感染。
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