达氟沙星（Danofloxacin）是一种动物专用的第三代喹诺酮类抗菌药物,具有抗菌谱广、杀菌活性强、体内分布广泛等优点,主要用于治疗禽细菌及支原体感染。而鸡群饲养密度高、生产环境差等现状加剧了家禽微生物感染的风险。当动物暴露于病原微生物时会诱发机体产生全身适应性免疫反应,从而激活免疫系统以进一步抵御外源微生物对动物的损害,但过度激活的免疫系统会诱发免疫应激;严重的感染甚至还会引起内毒素血症,从而使动物机体产生一系列的病理变化,这些变化将进一步影响药物在动物机体内的药动学特性。脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）作为革兰阴性菌的组成成分,具有生物学和免疫学活性,常被用于诱导动物产生免疫应激或者内毒素血症。目前,达氟沙星在健康动物体内的药动学研究较多,但在免疫应激和内毒素血症肉鸡体内的研究还很少。因此,本实验旨在探究大肠杆菌脂多糖诱导肉鸡免疫应激以及内毒素血症对达氟沙星药动学特征的潜在影响。其实验内容主要分为以下三个部分:1.达氟沙星在鸡血浆中检测方法的建立首先使用乙腈进行蛋白沉淀净化样品,然后采用高效液相色谱-荧光检测系统进行检测。研究表明,达氟沙星在鸡血浆中的保留时间为8.70 min左右,该响应处的色谱峰明显,无杂峰干扰,分离度较好;在0.001～2μg/mL范围内,鸡血浆中的达氟沙星浓度与其峰面积呈良好的线性关系,相关系数（R~2）均≥0.9999;达氟沙星的回收率为83.45%～107.58%;日内变异系数范围为0.41%～4.38%;日间变异系数范围为1.87%～9.20%。该检测方法易于操作,准确度及精密度好,能够满足本研究后续的药物检测要求。2.大肠杆菌脂多糖诱导肉鸡免疫应激对达氟沙星药动学特征的影响随机挑选20只体重相近的22日龄爱拔益加（Arbor Acres,AA）肉鸡,分为两组,每组10只。两组肉鸡在23、25、27和29日龄,同一时间分别腹腔注射等体积的大肠杆菌LPS稀释液或者无菌生理盐水,LPS的剂量为0.5 mg/kg体重（BW）。末次注射后,所有肉鸡立即以5 mg/kg BW的剂量口灌达氟沙星。通过翅下静脉采集各时间点的血清和血浆样品,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测鸡血清中白细胞介素-1β（IL-1β）和皮质酮（CORT）水平;采用高效液相色谱法（HPLC）检测达氟沙星的血浆药物浓度,并利用Phoenix软件进行非房室分析。血样采集完成后,每组随机挑选7只鸡（31日龄）处死,计算器官指数。结果表明,LPS攻毒导致免疫应激组肉鸡的肝脏、脾脏和腺胃指数显著升高且血清中IL-1β和CORT分泌增加,腹腔注射LPS成功诱发了肉鸡免疫应激。与对照组相比,LPS攻毒显著降低了达氟沙星在免疫应激组肉鸡中的药时曲线下面积(AUC0-∞)、达峰浓度(Cmax)和终末相半衰期(t1/2λz),而达峰时间(Tmax)显著增加。3.大肠杆菌脂多糖诱导肉鸡内毒素血症对达氟沙星药动学特征的影响选取体重相近的14只5周龄爱拔益加（AA）肉鸡,随机均分为内毒素血症组和对照组。内毒素血症组静脉注射大肠杆菌脂多糖,剂量为2.5 mg/kg BW;对照组肉鸡于同一时间静注等体积的无菌生理盐水。静脉注射1 h后所有肉鸡立即口服达氟沙星（5 mg/kg BW）。在预定时间点测定肉鸡的直肠温度,并采集各时间点的血浆和血清样品。采用ELISA检测鸡血清中白细胞介素-6（IL-6）水平,利用HPLC检测血浆中达氟沙星浓度,并使用Phoenix软件进行房室分析,计算达氟沙星的药动学参数。结果表明,LPS刺激导致内毒素血症组肉鸡的体温发生双相适应性变化且血清中IL-6水平升高,静脉注射LPS成功建立了肉鸡内毒素血症模型。与对照组相比,LPS攻毒显著增加了达氟沙星在内毒素血症组肉鸡中的Tmax和吸收相半衰期（t1/2ka）。综上所述,虽然达氟沙星在免疫应激组肉鸡中的吸收时间延长,但达峰浓度显著降低且消除加快,从而导致达氟沙星在免疫应激肉鸡体内的暴露量减少;此外,LPS攻毒导致达氟沙星在内毒素血症肉鸡中的吸收时间显著延长,但对其它药动学特征无显著影响。