目的：卵巢癌患者对化疗产生耐药性是影响疗效的主要原因之一。传统的逆转剂因副作用大而使得临床应用受到限制，因此寻找高效、低毒的逆转剂是目前研究方向及热点之一。重组改构人肿瘤坏死因子(recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmh-TNF)是由国内学者通过蛋白质工程技术改造天然TNF的结构而研制出的一种高效、低毒的TNF突变体。本研究通过体外实验观察rmh-TNF对人卵巢癌多药耐药细胞系SKOV3/DDP耐药性的影响，并对可能存在的机制进行初步的探讨，以期寻找一种新的药物帮助解决卵巢癌治疗中出现的多药耐药问题。 方法：体外培养人卵巢癌多药耐药细胞株SKOV3/DDP，采用四氮唑噻蓝盐(MTT)比色法检测rmh-TNF对SKOV3/DDP耐药株的细胞毒作用，选择杀伤率<10％的浓度作为该药物的无毒剂量，即本实验的逆转剂量。同法测定逆转剂量的rmh-TNF干预后细胞株SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化；应用流式细胞术(FCM)检测rmh-TNF干预不同时间段SKOV3/DDP细胞株中GST-π蛋白、BCL-2蛋白的表达，应用逆转录酶链反应(RT-PCR)分析rmh-TNF处理SKOV3/DDP细胞前后mdrl mRNA、BCL-2 mRNA的表达水平。 结果： 1、MTT结果显示：rmh-TNF在(50-3200)U/ml以内能抑制SKOV3/DDP细胞的体外增殖，且随着浓度增加抑制率相应上升。回归分析得出当rmh-TNF终浓度<122.34U/ml，其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90％)因此本实验选用100U/ml作为逆转剂量。100U/mlrmh-TNF作用SKOV3/DDP 24、48、72h的逆转倍数分别为1.19倍、2.20倍、2.64倍。 2、流式细胞术检测结果显示rmh-TNF处理前SKOV3、SKOV3/DDP两组细胞GST-π蛋白表达量的相对值(FI)分别是1、2.33±0.30，两株细胞GST-π蛋白的表达具有极显著性差异(P<0.01)，100U/mlrmh-TNF作用细胞SKOV3/DDP 24、48、72h后GST-π蛋白表达量的相对值随作用时间的延长而逐渐降低，FI值分别为1.82±0.13、1.73±0.28、1.31±0.17，作用前后比较均有显著性差异(P<0.05)；rmh-TNF处理前SKOV3、SKOV3/DDP两株细胞BCL-2蛋白表达量的相对值(FI)分别是1、2.62±0.15，两株细胞BCL-2蛋白的表达具有极显著性差异(P<0.01)，100U/ml rmh-TNF作用细胞SKOV3/DDP 24、48、72h后BCL-2蛋白表达量的相对值随作用时间的延长而逐渐降低，FI值分别为2.24±0.20、1.71±0.19、1.30±0.15，作用前后比较均有显著性差异(P<0.05)。 3、RT-PCR法检测结果显示rmh-TNF处理前SKOV3细胞株不表达mdrl mRNA，SKOV3/DDP细胞株mdrl mRNA表达量的相对值(mdrl/β-actin)是0.76±0.01。100U/ml rmh-TNF作用细胞株SKOV3/DDP 24、48、72，mdrl mRNA表达量的相对值随作用时间的延长而逐渐降低，mdrl/β-actin值分别为0.66±0.05、0.52±0.04、0.45±0.03，作用前后差异均有显著性。(P<0.05)；rmh-TNF处理前SKOV3、SKOV3/DDP两株细胞BCL-2 mRNA表达量的相对值(BCL-2/β-actin)分别是0.09±0.15、0.47±0.01，两株细胞BCL-2 mRNA的表达具有极显著性差异(P<0.01)，100U/ml rmh-TNF作用细胞SKOV3/DDP 24、48、72h后BCL-2 mRNA表达量的相对值随作用时间的延长而逐渐降低，BCL-2/β-actin值分别为0.45±0.01、0.31±0.01、0.27±0.01，作用前后比较均有极显著性差异(P<0.01) 结论： 1、重组改构人肿瘤坏死因子(rmh-TNF)在(50-3200)U/ml浓度范围内，对SKOV3/DDP细胞有生长抑制作用，且呈浓度依赖性。 2、逆转剂量的重组改构人肿瘤坏死因子(rmh-TNF)对SKOV3/DDP细胞耐顺铂效应有一定的逆转作用，且逆转效应存在时间-效应关系。 3、逆转机制可能为：①逆转剂量的重组改构人肿瘤坏死因子(rmh-TNF)可能通过下调耐药相关基因mdrl mRNA表达，进而降低SKOV3/DDP细胞的耐药性实现逆转耐药。②逆转剂量的重组改构人肿瘤坏死因子(rmh-TNF)可在转录和蛋白翻译水平降低BCL-2表达，进而降低BCL-2抑制凋亡的作用，使耐药细胞株凋亡增加，发挥对细胞耐顺铂效应的逆转作用。③逆转剂量的重组改构人肿瘤坏死因子(rmh-TNF)可能通过下调GSTπ表达，减少细胞毒性药物代谢产物的外排从而实现耐药性的逆转。