环境污染物在我们的日常生活中无处不在,人及动物可通过饮食、饮水、呼吸等多种方式暴露其中。卵巢是雌性哺乳动物重要的生殖内分泌器官,主要功能是排卵及分泌甾体激素。卵巢易受到环境中各种化学物质的影响,从而引发包括卵巢功能减退、内分泌紊乱等多种病症。五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene,PCNB）作为农业生产中常用的拌种剂及土壤杀菌剂,可在农作物中残留,并可在动物体内蓄积,给食品安全造成威胁。实验室前期研究发现PCNB连续7天暴露可对卵巢功能造成影响,目前尚没有PCNB相对长期暴露对卵巢功能影响的研究,故本研究在前期研究的基础上初步研究PCNB连续28天暴露对雌性大鼠卵巢生殖内分泌功能的干扰作用及其机制。以三周龄雌性SD大鼠为研究对象,将大鼠分组后分别进行玉米油和PCNB（50、100 mg/kg）灌胃处理,每日1次,连续28天。结果发现与对照组相比,50 mg/kg PCNB剂量组大鼠发情期缩短（P<0.05）,100 mg/kg PCNB组大鼠发情前期和发情期均缩短（P<0.05）,提示PCNB暴露可能引起大鼠动情周期紊乱。卵泡是卵巢的基本功能单位,为检测PCNB暴露对卵泡发育的影响,本研究对各级卵巢组织中各级卵泡进行切片染色后计数,结果发现与对照相比,50 mg/kg PCNB组大鼠生长卵泡有下降趋势,100 mg/kg PCNB组大鼠生长卵泡比例显著下降（P<0.05）,提示PCNB暴露可影响卵泡正常发育过程。抗苗勒氏管激素（AMH）属于转化生长因子β（TGF-β）超家族,可抑制原始卵泡募集和初级卵泡的生长。我们通过免疫组织化学和Western印迹的方法,对大鼠卵巢组织中AMH的表达情况进行检测,结果显示,AMH主要位于次级卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞中,PCNB暴露后大鼠卵巢中AMH的表达量降低。卵巢合成的甾体激素主要是孕激素和雌激素,对雌性哺乳动物生殖功能的维持具有重要意义。PCNB灌胃结束后于发情间期将大鼠处死并采集静脉血,通过电化学发光法检测大鼠血清甾体激素浓度,结果发现50 mg/kg及100 mg/kg PCNB剂量组大鼠孕酮水平均显著上升（P<0.05）,其中50 mg/kg PCNB剂量组大鼠血清孕酮上升幅度略高于100 mg/kg剂量组雌二醇水平在两个实验组均显著下降（P<0.05）。为进一步研究血清甾体激素发生变化的原因,我们通过Western印迹的方法对卵巢组织中甾体激素合成关键酶的表达量进行了检测,研究发现PCNB暴露后大鼠卵巢组织类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）的表达上调,其中50 mg/kg PCNB剂量组的上调更为明显,但各组组间差异无统计学差异（P>0.05）。与对照组比较,50 mg/kg实验组大鼠卵巢组织中胆固醇侧链裂解酶（P450scc）表达上调,100 mg/kg实验组P450scc表达下调,各组组间差异不具有统计学意义（P>0.05）。甾体激素合成关键酶StAR和P450scc在50 mg/kg PCNB剂量组的表达量均略高于100 mg/kg PCNB剂量组,这与大鼠血清孕酮水平在50 mg/kg PCNB剂量组略高于100 mg/kg PCNB剂量组的情况相符,提示StAR及P450scc可能均在PCNB暴露导致的血清孕酮水平上调中发挥作用。芳香化酶是雌二醇合成的限速酶,Western印迹结果显示,PCNB暴露可导致大鼠卵巢组织中芳香化酶水平显著下降,这与血清雌二醇水平下降相符,提示PCNB可通过抑制卵巢中芳香化酶的水平引起血清激素水平下降。RNA-Seq结果发现,PCNB处理前后大鼠卵巢组织差异表达基因主要与信号受体结合、激素活性、激素受体结合等功能相关,MAPK信号通路是差异表达的基因富集较多的通路。综上,本研究表明PCNB连续暴露28天可干扰大鼠发情周期,降低卵巢中生长卵泡比例及AMH表达量。PCNB暴露可导致血清孕酮水平显著上升、雌二醇水平显著下降,这可能是通过影响卵巢组织中甾体激素合成关键酶的表达量实现的。MAPK信号通路可能参与了 PCNB导致的卵巢功能损伤。