【摘 要】
：
蚊虫的防治目前还是一个综合性难题，近年来拟除虫菊酯类杀虫剂由于其高效的杀虫性而得到了迅速的发展，然而大量、长期的使用已使蚊虫对其产生了越来越严重的抗药性。因此，探明蚊虫针对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性机理，以及抗性相关基因及其功能是非常必要的。本研究以淡色库蚊为材料，克隆和分析其对氯菊酯抗性相关的功能基因，并进一步验证了此基因在抗性和敏感性的蚊子C6/36细胞中的表达差异。首先，根据实验室前期得到的在
论文部分内容阅读
蚊虫的防治目前还是一个综合性难题，近年来拟除虫菊酯类杀虫剂由于其高效的杀虫性而得到了迅速的发展，然而大量、长期的使用已使蚊虫对其产生了越来越严重的抗药性。因此，探明蚊虫针对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性机理，以及抗性相关基因及其功能是非常必要的。本研究以淡色库蚊为材料，克隆和分析其对氯菊酯抗性相关的功能基因，并进一步验证了此基因在抗性和敏感性的蚊子C6/36细胞中的表达差异。首先，根据实验室前期得到的在敏感蚊和抗性蚊子中差异表达的EST序列（NCBI登录号为EC093833.1），利用RACE技术，克隆得到了基因的cDNA全长序列；通过生物信息学的方法对cDNA序列和其编码的蛋白序列进行分析。结果显示：这是一条cDNA全长为1679的全新基因，将其命名为PR-XP2。生物信息学结果表明，PR-XP2基因具有完整的开放阅读框，位于核苷酸序列的112～1683区域，编码523个氨基酸。同源性比对结果表明，PR-XP2基因与埃及伊蚊、致倦库蚊的CYP450基因的同源性达到了75%以上，且该基因蛋白中的第50-342位氨基酸与细胞色素P450家族的保守域完全一致，由此可以推测PR-XP2基因属于P450基因家族。其次，利用蚊子的肠上皮细胞C6/36细胞系，培养并加药筛选至其产生氯菊酯抗性，然后用半定量RT-PCR的方法检测抗性细胞系和敏感型的细胞系中PR-XP2基因的表达差异，从而推测PR-XP2基因和抗性的相关性。本试验采用浓度递升法，成功的获得了具有氯菊酯抗性的C6/36细胞株，用MTT法测定其对药物的半数致死浓度（LC50）达到了984μg/L，达到了可以用于差异性研究的抗性水平（1000μg/L）。半定量RT-PCR结果显示：PR-XP2基因在抗性细胞和敏感性细胞中的表达量有明显的差异，在抗性细胞中的表达量高。表明PR-XP2基因和淡色库蚊的氯菊酯抗性是相关的。综上所述，（1）克隆了一条淡色库蚊基因，命名为PR-XP2，用生物信息学进行了分析，发现其属于P450超基因家族；（2）筛选出了对拟除虫菊酯类杀虫剂氯菊酯具有高抗性的蚊子C6/36细胞株；（3）采用半定量RT-PCR的方法，检测了PR-XP2基因在敏感细胞和抗性细胞中的表达量，发现抗性细胞中的表达量明显高于敏感细胞，表明PR-XP2基因和淡色库蚊的氯菊酯抗性相关。这为蚊虫抗性机制的研究打下了重要的基础。
其他文献
藏豆（Stracheya tibetica Benth.）是藏豆属（Stracheya Benth.）的唯一种，隶属豆科（Leguminosae）岩黄耆族（Hedysareae）。藏豆与岩黄耆属（Hedysarum Linn.）的关系密切，或独立为单种属，或作为岩黄耆属的一员，不同学者观点不一。为了探讨藏豆的系统归属，本文从藏豆及其相关类群的小叶脉序形态、荚果解剖特征、藏豆的染色体数目、基于ITS
氢能被认为是最具有发展潜力的“未来能源”之一，世界各国均投入大量的资金探索氢气的生产途径和氢能应用可能。在众多的制氢方法中微生物制氢备受关注，成为当前研究的热点领域。在微生物产氢中，光合细菌产氢以其利用底物效率高、利用光谱范围广、光能利用效率高、不产生氧气等优势而备受关注。本研究从杨凌周边地区分离鉴定了28个光合细菌菌株，并对其产氢能力及氢酶进化进行了初步研究，主要结果如下：1.光合细菌分离鉴定：
DMRT1是一种在哺乳动物睾丸生殖细胞和其支持细胞中表达，对哺乳动物睾丸发育起关键作用的一种转录因子。Sox2是一种干性转录因子，在维持小鼠胚胎干细胞的多能性和自我更新过程中起关键作用。为了阐明DMRT1对Sox2的调控作用，本研究以小鼠F9细胞系为模型，利用实时定量PCR（Real timePCR）、双荧光素酶报告基因分析（Dual-Luciferase Reporter assay）等方法，从
拟南芥G蛋白复合体（异源三聚体包括α、β、γ亚基）参与植物多个信号转导途径，G蛋白复合体通过膜上的G蛋白偶联受体（GPCR）接受胞外信号后通过三个亚基将信号传递给下游效应器。目前，有关植物G蛋白复合体的效应器及其信号传递途径的报道较少，寻找新的G蛋白的效应器有助于阐明G蛋白复合体相关的信号传导途径。本研究以拟南芥为实验材料，提取总RNA构建拟南芥均一化cDNA文库，并以拟南芥G蛋白α亚基GPA1为
水分亏缺在我国北方地区的植物生长发育过程中是不可避免的问题，改善植物根系吸水能力对植物生长的促进和作物产量的提高有不可忽视的作用。细胞压力探针是目前唯一能直接进行植物细胞水力学特性原位测定的仪器；脱落酸（ABA）做为一类生理作用广泛的植物激素已经得到许多研究，然而ABA对植物根系吸水的调节作用机制仍不清楚。本研究以水培野生型和ABA受体突变体拟南芥为实验材料，利用细胞压力探针技术，对外源ABA处理
单半乳糖甘油二酯（MGDG）是种子植物中一种重要的半乳糖脂，它与双半乳糖甘油二酯（DGDG）主要存在于光合膜上并占到了光合膜半乳糖脂的80%以上。MGDG和DGDG不仅参与了植物质体膜的构建和膜上光合复合体的形成，在缺磷条件下还能替代植物体内缺失的磷脂。单半乳糖甘油二酯合成酶（MGD）是合成MGDG的关键酶，所以也被认为是光合膜形成的关键酶，在缺磷条件下MGD的活性被激活，MGD在盐胁迫和干旱条件
全变态类昆虫的幼期与成虫期具有明显不同的形态特征和生活习性，在其生命周期中占据重要地位。然而，目前的分类学和形态学研究主要集中于成虫期，而对幼期的研究明显不足。长翅目作为全变态类昆虫中最原始的类群之一，其系统发育地位一直存在争议。长翅目各科之间的系统发育关系，尤其是蝎蛉科与拟蝎蛉科的系统发育关系尚未完全确定。前人对长翅目的系统发育分析主要基于成虫形态特征和分子生物学数据。幼虫形态特征在长翅目系统发
柳枝稷（Panicum virgatum L.）和草芦（Phalaris arundinacea L.）由于环境友好、适应性强和产量大等特点被确认为是一种新型的能源植物。为了能够成功的大规模种植这两种能源草，对它们进行水肥耦合的栽培试验迫在眉睫。试验设计采用二因子五水平正交组合设计方案，共22个处理，每个处理3个重复。以土壤含水量（X1）和施氮量（X2）作为实验因素。试验设五个水分梯度：分别为土壤
必要基因组研究在新药研制，合成生物学和基础生物学等领域都具有重要的实践和理论意义。通过比较不同物种之间必要基因在功能和生物过程中的分布，可以系统的把握物种之间必要途径的异同以及它们与表型的联系。本文首先比较分析了17个物种（六个门）的必要基因在22个功能类的分布和富集情况，结果表明参与翻译过程的必要基因的数目和富集显著性都是最高的。除此之外，必要基因普遍富集的功能类有辅因子和维他命代谢，核苷酸代谢
蛋白质之间的相互作用有的发生于蛋白质复合体内部，有的仅仅是多个或两个蛋白质之间短暂的相互作用。这种蛋白质之间的相互作用及其不断的变化对生物体的功能、新陈代谢发挥着十分核心的作用。许多蛋白质之间的两两相互作用整合在一起就形成了蛋白质相互作用网络。蛋白质相互作用（网络）的预测和分析对于揭示生物学奥秘起着十分重要的作用。本文探讨了一种基于蛋白质相互作用网络挖掘物种内功能相似蛋白质的方法。使用图论为计算模