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猪囊虫病,又称猪囊尾蚴病,是由猪带绦虫引起的一种重要的人畜共患寄生虫病,呈世界性分布,但以发展中国家较为多见。猪囊虫病不仅引起猪发病,而且人类通过误食病猪肉也可导致感染,严重威胁着人类健康与动物性食品安全,也给养猪业造成巨大经济损失。猪囊虫病的传统检测方法(例如感官检测和ELISA等)分别存在灵敏度不高、检测时间较长等缺点。因此,建立一种快速、敏感的猪囊虫病检测方法具有重要意义。本研究即针对这一问题建立了操作简便、快速、灵敏的免疫胶体金检测方法。
一、检测猪囊虫病的胶体金斑点渗滤法
本研究通过分离纯化猪囊虫抗原,免疫家兔,制备了多克隆抗体,以亲和层析原理为基础,采用硝酸纤维素膜为固相载体,用胶体金直接标记纯化的囊虫抗原,建立了诊断猪囊虫病的斑点金标免疫渗滤法。实验结果表明,囊虫抗原与胶体金溶液结合的最佳pH值为7.5,最佳浓度为52μg/ml,进行检测时血清的最佳稀释度为1∶10。实验结果显示,该方法特异性强,重复性和稳定性好,操作简便,检测需时短,适用于猪囊虫病的诊断、流行病学的调查以及疫病监控。
二、检测猪囊虫病的胶体金免疫层析法
本试验以高特异性的抗原抗体反应及胶体金标记技术为原理组装检测试纸条,试纸条分吸水纸、硝酸纤维膜、胶体金垫、样品玻璃纤维垫四部分。玻璃纤维经清洗处理后,37℃烘干,将采用胶体金标记的纯化的囊虫抗原喷涂于玻璃纤维上,37℃培养箱干燥后,即制备成胶体金垫。将囊虫纯化抗原和兔抗囊虫病IgG分别喷于硝酸纤维膜的检测线和质控线上,将胶体金和抗原的偶联物粘附于玻璃纤维膜上,通过双抗原夹心法(抗原-抗体-抗原),实现对猪囊虫病抗体的特异性检测,初步建立了一种诊断猪囊虫病的胶体金免疫层析快速检测方法。该方法特异性强,用不同猪患囊虫病的阳性血清试验,检出率为100%,该方法操作简单快速,无需昂贵仪器设备,适用于猪囊虫病的诊断、流行病学的调查以及监控。
本实验通过分离纯化猪囊虫抗原,免疫家兔,制备了纯化抗原和多克隆抗体,展开猪囊虫病免疫学快速检测方法的研究,建立了检测猪囊虫病的斑点金标免疫渗滤法和胶体金免疫层析法,两种方法均取得了较理想效果,具有特异性强、检测速度快、操作简便的优势。本研究结果可用于研制开发商品化的猪囊虫病快速检测试剂和试纸,为生猪检疫以及人感染猪囊虫病诊断提供快速方便的检测方法,有着良好的应用前景。本项技术对保障食品安全、保护我国人民生活卫生水平、促进活猪和猪肉产品的出口贸易以及未来实施猪囊虫的根除计划都具有重要的现实意义。