草原革蜱和边缘革蜱线粒体基因组精准注释及LTS多态性分析

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蜱是一类重要的人畜共患寄生虫,可传播大量病原体且对畜牧业危害极大。线粒体具有自身转录翻译的功能,其基因组高度保守有助于分析物种特异性、遗传多样性和生态地域性。蜱线粒体基因组的重排方式与其系统发育及基因功能相联系。线粒体基因组的系统进化分析已解决了蜱目中很多争议属和争议种的分类问题。截止到2022年3月底,NCBI上已公开3科15属88种蜱的线粒体全基因组,仅占蜱种总数的9.2%。目前一些重要种群的线粒体基因组数据还未获得,致使革蜱属和血蜱属的单源性问题、软蜱科的属和亚属的划分一直存在争议。此外,线粒体基因组的精准注释可以在获取准确序列的基础上提供更多的遗传信息,在揭示线粒体基因组的转录调控和遗传变异机制方面具有重要意义。本研究通过高通量测序长片段PCR扩增产物获取了草原革蜱和边缘革蜱的全长线粒体基因组,并结合小RNA高通量测序数据对这两个线粒体基因组精准注释到1bp。此外,在前期发现森林革蜱线粒体基因组存在转座子类似元件(transposon-like element)的基础上,进一步大量扩增不同地区的草原革蜱、边缘革蜱、银盾革蜱、森林革蜱的串联重复片段(TR),分析其所在的大型易位片段(LTS)的序列特征及核苷酸多态性。主要结论如下:1.获得边缘革蜱的全长线粒体基因组,大小为15225bp。获得草原革蜱的全长线粒体基因组,大小为14986bp。首次对以上两个线粒体基因组精准注释到1bp,即线粒体基因组的每个碱基均有各自的归属。为后期深入研究草原革蜱和边缘革蜱线粒体基因组的调控机制、遗传变异及系统进化分析提供了翔实的数据支持。2.精准注释草原革蜱和边缘革蜱线粒体基因组的TR2、ND1、t RNALeu、16S r RNA、t RNAVal、12S r RNA、CR1、t RNAIle、t RNAGln和TR1这些基因为LTS,其中TR1和TR2类似为转座子的反向重复序列(Irs),两者互为反向互补序列,而ND1到t RNAGln的基因类似为转座子的插入序列(Iss)。3.通过分析发现,TR1和TR2的重复单元和重复次数在不同蜱种间具有差异,而同一蜱种不同地理种群的重复单元趋于相同,但重复次数有差异。一般而言,同一蜱种的TR2的重复次数等于或多于TR1;革蜱属含有TR2和TR1,而扇头蜱属只含有TR1。古北界分布的革蜱对44nt的重复单元[TTTGCATCATTTTTTGGAATTAAAACTCAATCTTTTTAATTTTA]选择性最高,重复次数在8次以下,无明显规律但大体上偏向选择4次半。革蜱属的所有重复单元,后部21nt是共享的。4.进一步研究发现TR不随着性别发生改变,同时同一母体的子代TR完全一致,目前尚不清楚是何原因具体影响了TR的多态性,可能是DNA重组。综上,PCR扩增与二代测序结合是获得蜱线粒体基因组全长及进行精准注释的一种可靠且相对快捷的方法。此外,TR在LTS中的具体功能以及在不同蜱种的进化规律还需深入研究。
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