光谱法测定加替沙星及动物尿样中白蛋白的研究

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药物分析学是药学领域中的重要组成部分,药品质量的优劣,直接关系到患者的身体健康乃至生命安全。因此,为了确保人们用药的安全、合理和有效,必须对药品质量进行全面控制。能够简便、快速地从复杂样品中可靠、灵敏地检测出痕量药物成分是当前药物分析的发展趋势。适应这一要求,光谱法因其设备简单、操作方便、准确度好、灵敏度高以及适用范围广成了药物分析中最基本和最主要的研究手段和方法之一。随着我国畜牧业的发展,畜禽品种和数量都有了很大幅度的增加。相应地,畜禽疾病的种类和发生频率也大大增加。因此,畜禽疾病的快速诊断就成为很重要的研究课题。血清白蛋白是体液中含量最丰富的蛋白质,体液中蛋白质含量的测定已经被广泛作为诊断人患疾病的依据之一,但是关于动物体液(如尿样等)中蛋白质含量的测定及其在动物疾病诊断中的应用研究则较少。本文以光谱法作为检测手段,建立了测定药物加替沙星、牛尿样品中白蛋白的更简单、更灵敏的新方法,以期能为动物疾病的防治和诊断做一些基础性、有参考意义的工作。主要研究内容包括:一、综述了光谱分析法中分光光度法、荧光光谱法、共振散射光谱法在药物和蛋白质分析中的研究现状。二、建立了利用紫外吸收增敏法测定加替沙星(Gatifloxacin,GTFX)含量的新方法:以阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethylammoniumbromide,CTMAB)为增敏剂,在292 nm处测定体系的吸光度,根据标准曲线计算GTFX的含量。并将此方法用于加替沙星片剂和粉针剂的测定,结果与文献报道的荧光法一致。三、利用荧光共振能量转移猝灭法测定加替沙星:在pH=7.00的伯瑞坦-罗宾森(Britton-Robinson,B-R)缓冲溶液和阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)的存在下,吖啶橙(Acridine orange,AO)与罗丹明B(Rhodamine B,RB)之间能够发生有效的能量转移,使RB的荧光增强。GTFX的加入又使得RB的荧光猝灭,据此建立了测定加替沙星的新方法。将此方法用于加替沙星片剂和粉针剂的测定,结果与文献报道的紫外法一致。实验表明:该测定方法简单、快速、准确、灵敏。四、研究了刚果红(Congo Red,CR)与蛋白质的结合反应:在非离子表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚(乳化剂OP)的存在下及pH=4.35的B-R缓冲介质中,蛋白质与刚果红形成复合物,使573 nm处的共振光散射强度得到加强,并且增强的共振光散射信号与蛋白质的浓度成正比,据此建立了一种测定蛋白质的新方法。将此方法用于牛尿样品中蛋白质含量的测定,结果与经典的考马斯亮蓝法一致。五、在阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SLS)的存在下及pH=4.00的B-R缓冲介质中,研究了茜素红(Alizarin Red,AR)与蛋白质的结合反应:蛋白质与茜素红形成复合物,使533 nm处的共振光散射强度得到加强,并且增强的共振光散射信号与蛋白质的浓度成正比,据此建立了另一种测定蛋白质的新方法。将此方法用于牛尿样品中蛋白质含量的分析测定,结果与经典的考马斯亮蓝法一致。
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