茶树内生真菌的分离和其对茶叶主要成分的影响研究

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茶树内生真菌分布具有普遍性,与茶树长期共生,具有影响宿主代谢的生物学作用,可以改变茶树的一些代谢途径,是巨大的资源宝库,具有重大的研究和开发价值。本文以茶树为研究材料,从茶树中分离内生真菌,分离到的内生真菌进行了以下几个方面的研究:1.茶树内生真菌的最佳分离条件探索;2.茶树优势内生真菌的分离与鉴定;3.茶树内生真菌的分布特性研究;4.芒果球座菌(Guignardia mangiferae)对茶叶主要成分的影响研究;5.茶树内生优势真菌对茶树病原菌的抑菌作用初试。研究结果如下:  1、从茶树里分离出内生真菌,对分离条件进行初步的研究,确定了3%的次氯酸钠作为其主要的表面消毒剂,成熟叶片表面消毒的最佳时间为5 min;采用PDA为一般培养的最适培养基。  2、茶树内生真菌分布具有多样性,根据菌落的形态鉴定,在供试4个茶树品种中,分离出来的菌属有球座菌属(Guignardia spp),木霉属(Trichoderma spp.)、拟盘多毛孢菌属(Pestalotiopsis spp.)、炭疽菌属(Colletotrichum spp.)、青霉属(Penicilliumspp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)等。茶树品种和叶片龄期对茶树内生真菌分布的影响,结果发现:金萱的内生真菌分离频率达96.67%,而福云六号只有76.67%,表明茶树品种不同,其叶片中内生真菌存在明显差异;且叶片龄期是影响茶树内生真菌种群结构的主要因子,叶片总内生真菌的种类与数量与叶片龄期呈正相关,随着茶树叶片的成熟,逐渐增多。  3、以分离自茶树的优势真菌CY1为材料,采用形态特征学观察属于球座菌属(Guignardia),再以18SrDNA序列分析和rDNA的ITS序列分析相结合,把序列输入NCBI网站进行Blast比对,再用Mega软件建立进化树,该菌株与芒果球座菌聚在一起。结合形态学方面鉴定,初步判断菌株CY1为芒果球座菌(Guignardiamangiferae)。  4、初步探究芒果球座菌对茶叶主要成分的影响,结果表明,随着发酵时间的延长,茶多酚和儿茶素大部分氧化或降解,氨基酸、可溶性糖含量显著降低,咖啡碱含量略微减少,与此同时一未知成分的含量显著增加,其结构解析有待进一步研究。  5、开展了茶树优势内生真菌对茶树病原菌的抑菌作用研究,芒果球座菌和拟盘多毛孢属对茶园赤星病菌(Cercospora theae)、茶藻斑病菌(Cephaleuros virescensKunge)和茶网饼病菌(Exobasidium reticulatum)都有抑制作用,芒果球座菌对茶树病原菌表现明显的拮抗作用。
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