云南元宝枫黄酮抗小鼠结肠癌移植瘤模型的实验研究

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:rgypf1988
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目的:观察云南元宝枫黄酮对结肠癌CT-26细胞株体外增殖的影响和对Balb/c小鼠CT-26结肠癌的抑瘤及抗血管生成作用,探讨云南元宝枫黄酮抑瘤的作用机制,为结肠癌的治疗提供一种新的思路和方法。方法:1.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同时间和不同浓度黄酮对结肠癌细胞株CT-26的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。2.采用鼠CT-26肿瘤细胞悬液皮下接种法在72只Balb/c小鼠右前腋皮下建立鼠CT-26肿瘤细胞结肠癌移植瘤模型。小鼠随机分为预防组和治疗组,预防组分为实验组和对照组,治疗组也分为实验组和对照组,分别设低(100 mg/kg/d)、中(200 mg/kg/d)、高(400mg/kg/d)三个剂量组,空白对照组灌注等体积5%DMSO溶液。每个剂量组各6只Balb/c小鼠。预防组采用灌胃给药法连续给药一周后,于右前腋皮下接种结肠癌CT-26细胞,随后继续灌胃给药三周。治疗组于右前腋皮下接种CT-26细胞24h后,采用灌胃给药法连续给药四周。待小鼠自然死亡,记录小鼠存活天数,绘制生存曲线,比较各组实验动物生存期及肿瘤抑制率。实验期间每周用电子秤称量小鼠体重两次、用游标卡尺测量在体肿瘤体积两次,根据小鼠体重的变化调整用药剂量。肿瘤体积=a2bπ/6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径)。肿瘤组织进行苏木精-伊红染色(HE染色)比较各组小鼠肿瘤生长情况及血管内皮生长因子(VEGF)免疫组织化学染色,比较各组小鼠VEGF在肿瘤细胞的表达情况,并采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:1.云枫黄酮可以抑制Balb/c小鼠结肠癌细胞株CT-26的增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性。经云枫黄酮作用结肠癌CT-26细胞株,24、48、72小时后的IC50值分别为45.16±0.94μg/ml、37.64±0.79μg/ml、33.24±0.72μg/ml;2.成功构建小鼠结肠癌CT-26细胞株移植瘤模型,比较各组小鼠的中位生存期。结果显示,空白对照组中位生存期为22±2.57天,预防实验组中位生存期分别为:低剂量组27±3.46天,中剂量组为34±2.52天,高剂量组为42±3.28天。治疗实验组中位生存期则分别为:低剂量组26±2.34天,中剂量组为30±2.26天,高剂量组为36±2.75天。各实验组和对照组差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量组、中剂量组、高剂量组三组Balb/c小鼠生存时间较空白对照组明显延长(P<0.05)。3.5%DMSO溶液对照组、治疗及预防实验低、中、高剂量组的肿瘤体积(mm3)分别为16.60±3.45、8.35±1.03、5.49±0.42、3.22±0.25、7.86±0.94、4.82±0.36、2.55±0.17。对照组肿瘤体积与低剂量组、中剂量组、高剂量组三组之间均有统计学差异(P<0.05),低剂量组、中剂量组、高剂量组之间无统计学差异(P>0.05),低剂量组、中剂量组、高剂量组对肿瘤的抑制率依次为29.5%、58.7%、87.5%、33.6%、61.7%和90.6%。4、6例鼠CT-26肿瘤细胞结肠癌移植瘤模型肿瘤组织中Bcl-2蛋白阳性表达3例(50%),Bax蛋白阳性表达3例(50%),VEGF蛋白阳性表达5例(83.3%),与对照组比较,具有显著性差异(P<0.05)。结论:1、体外实验证实,云南元宝枫黄酮可抑制鼠结肠癌CT-26细胞株的增殖。2、按低(100 mg/kg/d)、中(200 mg/kg/d)、高(400 mg/kg/d)三个剂量给予小鼠灌胃云南元宝枫黄酮均可抑制Balb/c小鼠肿瘤组织皮下移植瘤的生长,从而验证了云南元宝枫黄酮的抗肿瘤作用,3、云南元宝枫黄酮能够延长荷瘤Balb/c小鼠的生存时间。4、云南元宝枫黄酮抑制小鼠结肠癌细胞株CT-26的生长和转移的机制可能是其抗肿瘤血管生成的作用,以及通过下调Bcl-2和上调Bax的表达诱导结肠癌细胞CT-26的凋亡,继而抑制其生长。
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