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(一)研究目的在中国,结直肠癌最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于肺癌、胃癌和肝癌。随着我国经济的发展生活水平的提高,生活环境和饮食结构也随之变化,导致了我国结直肠癌的发病率处于持续上升状态。随着现代科学技术的进步,不断有新的诊断和治疗工具的出现,包括癌前筛查、手术、多学科治疗、化疗和放疗等。然而大多数患有结直肠癌的患者,特别是肿瘤晚期,其5年生存率较低而且还有较高的复发率。随着对于肿瘤发生发展的不断地研究,在分子领域的研究提出了三种理论,包括正常基因损伤所带来的癌细胞的产生,癌基因的异常激活以及抑癌基因的突变所发生的功能失调。NLRC3(NLR family CARD domain containing 3,含有3个效应域的核苷酸结合寡聚化)是NLR(nucleotide-binding domain and leucine-rich repeats,核苷酸结合寡聚化结构域)家族中的一员,NLRC3(也称为CLR16.2或NOD3)是NLR家族中表征不佳的成员,并且在基因组筛选中鉴定了其编码具有富含亮氨酸的重复序列(LRR(leucine rich repeat,富含亮氨酸的从复序列))和核苷酸结合域的蛋白质的基因。有研究发现,缺乏NLRC3的小鼠易发生结肠炎和结直肠肿瘤。NLRC3的作用在结直肠细胞中最为显著,作用之一是它能抑制mTOR信号传导途径的活化并抑制细胞增殖和干细胞衍生的类器官形成。NLRC3与PI3Ks结合并在生长因子受体或Toll样受体4结合后阻断PI3K依赖性激酶AKT的激活。这些发现揭示了 NLRC3作为mTOR途径抑制剂的关键作用,抑制结肠直肠肿瘤的发生发展。本研究的重点是NLRC3在人结直肠肿瘤中的表达及其其表达与临床参数间的关系。(二)研究方法1.应用免疫组织化学S-P(Strptavidin-Perxidase,链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶)法,在116例结直肠恶性肿瘤组织,60例癌旁组织和10例腺瘤组织中检测NLRC3的表达,并研究其与临床病理参数的关系。判断标准:由两位不知情并且经验丰富的病理专家进行读片并判定结果。基于肿瘤细胞的着色比例和染色程度进行NLRC3表达的定性测定。综合细胞的着色比例以及染色程度,将其各自评分后叠加,制定出最后的评分准侧。将其分成4级。2.选取首次经结直肠癌根治术后,切缘为阴性的距肿瘤5CM以上的正常粘膜为阴性对照。采用Western Blot方法来检测NLRC3蛋白在新鲜结直肠肿瘤组织与正常黏膜组织中的表达,并以β-actin为内部对照,使用Image-pro plus Version6.0.1图像分析系统测定实验结果。3.使用SPSS23.0统计软件对结果进行分析,采用x 2检验分析NLRC3的表达与临床病理因素的关系,p<0.05为有统计学意义。(三)研究结果1.免疫组织化学:(1)NLRC3在116例结直肠恶性肿瘤组织中的阳性表达率为75.86%(88/116),在正常的结肠直肠黏膜组织阳性表达率高达100%;在正常黏膜、腺瘤、高分化、中分化癌、低分化癌中强阳性率分别为61.67%、40.0%、37.5%、21.4%、0%,其表达率与肿瘤分化程度显著相关(p=0.001)。(2)NLRC3表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、转移、肿瘤形态以及临床TNM分期无显著相关(p>0.05)。2.蛋白印迹:对其进行灰度值测定,并根据x2检验分析结果,x 2=689.23,p<0.01,其表达差异有显著性。(四)结论NLRC3蛋白的的表达与结直肠肿瘤的分化程度密切相关,NLRC3在结直肠肿瘤中表达下调。NLRC3的表达与肿瘤分化程度呈负相关,提示NLRC3可能参与结直肠肿瘤的发生和发展,其检测对结直肠肿瘤的早期诊断、治疗、预后都有一定的价值。