携带blaCTX-M-27P1-like噬菌体流行性调查及特征分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaojunsyt
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超广谱β-内酰胺酶(ESBL),尤其是CTX-M亚型在中国乃至世界范围内的流行呈现逐年增长的趋势,CTX-M主要介导细菌对第三、四代头孢类药物耐药。在过去的报道当中,人们大多关注由质粒介导此类耐药酶基因的水平传播.在本文中,我们根据本试验室发现的携带blaCT X-M-27的P1-like噬菌体PJ46的全序列,设计P1-like噬菌体中稳定存在且较为保守的特征基因(repL)引物,通过PCR扩增,对携带blaCT X-M-27的大肠杆菌和沙门菌进行P1-like噬菌体的流行性调查,以期了解P1-like噬菌体介导的耐药基因blaCT X-M-27的流行情况。此外,对携带blaCT X-M-27的P1-like噬菌体及质粒进行了特征研究,以期从分子水平分析blaCTX-M-27的流行和传播机制,为减缓blaCT X-M-27基因流行和传播提供理论基础。本研究对2003年至2014年间广东、广西、湖南、湖北采集的携带blaCT X-M-27的动物源沙门菌(40株)和大肠杆菌(20株)进行药物敏感性试验,结果显示,菌株对β-内酰胺类药物具有较高的耐药率,且多药耐药现象严重。菌株对头孢噻肟、氨苄西林、卡那霉素、氟苯尼考的耐药率均为100%,对头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星、四环素及氯霉素的耐药率均达到90%。经接合转移和转化试验,共获得40株转化子及20株接合子,接合子及转化子均成功转移blaCT-M-27耐药基因。对接合子及转化子进行PCR扩增检测噬菌体标志基因repL,结果显示,36株沙门菌转化子检出该基因,而大肠杆菌接合子中未检出该噬菌体标志基因。对接合子及转化子进行S1-PFGE及blaCT X-M-27和repL基因探针Southern-blot杂交,结果显示,33株检出repL的沙门菌转化子,两种基因可以被杂交于同一位置,证明了由P1-like介导的blaCT X-M-27的传播。经PCR检测复制子类型,20株大肠杆菌质粒中,13株为FIB型,1株为HI2型,2株为FIB型和HI2型复合型质粒,1株为FIB和N型复合型质粒,另有3株分型不成功。40株沙门菌中,6株为FIB型,一株为N型,另有33株分型不成功。证明FIB型质粒对blaCT X-M-27的传播具有重要作用。对转化子及接合子提取质粒并进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,结果显示,P1-like噬菌体可以切出组内相似性≥80%的两种类型的条带,证明噬菌体间有较高的相似性,而仅携带blaCT X-M-27的大肠杆菌及沙门菌质粒能够酶切出不同的条带类型,证明质粒间的差异较大。基因环境调查结果显示,blaCT X-M-27的上游42 bp处均检测到ISEcp1-like序列,下游均检测到IS903D,是典型的△ISEcp1-blaCT X-M-27-IS903转移组合单位,对于blaCT X-M-27的传播有重要作用。综上所述,大肠杆菌blaCT X-M-27主要通过FIB型质粒进行水平传播而沙门菌中存在含有P1-like噬菌体菌株的克隆传播,而且P1-like噬菌体对blaCT X-M-27在不同沙门菌中水平传播起到了重要的作用。
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