MALDI-TOF-MS用于细菌检测的初步研究及水环境中细菌质谱图库建立

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近年来,生物质谱技术得到了快速发展,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)就是新近发展起来的应用于微生物快速检测的一项技术,它可以通过检测细菌形成的特异性指纹图谱(fingerprint)来建立细菌指纹图谱库,将待测细菌质谱图利用图谱库进行检索比较,可以确定细菌的种属。 质谱法用于细菌鉴定的指标是细菌特异性的质谱图,要实现对细菌的鉴定,必须要保证质谱图的重现性。本课题从各个方面研究了MALDI-TOF-MS用于细菌检测时影响质谱图重现性的因素,并在此基础上初步建立了水环境中有卫生学意义的部分细菌的质谱图库,研究了这些细菌加标水样的质谱图重现性,同时还进行了MALDI-TOF-MS用于区分耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的初步研究。 1.实验条件和细菌质谱图重现性的研究。从仪器的设定条件、基质、培养基、培养时间等四个方面研究了其对细菌质谱图重现性的影响。结果表明:仪器的设定条件对质谱图重现性的影响可以通过校准的方式消除;样品与基质的不同点样方式不会影响质谱图重现性;不同的培养基、培养时间对质谱图重现性都会产生影响,可以通过建立一套完整的操作程序来实现质谱图的重现性;选择不同的培养基有助于对特定细菌的检测。 2.建立水环境中有卫生学意义的细菌质谱图库。在实现质谱图重现性的基础上,建立了包括19属41种45株细菌的质谱图库。这些细菌包括肠杆菌科的细菌和能够引起腹泻、食物中毒的部分革兰氏阴性和阳性细菌,也包括有重要卫生学意义的葡萄球菌和链球菌。在建库的45株细菌中,41株(91%)以大于90%的相对概率可以实现属水平上的匹配,24株(53%)细菌可以实现株水平上的匹配,其中革兰氏阳性细菌全部可以实现株水平上的匹配,多数革兰氏阴性细菌可以实现属水平的匹配,肠杆菌科细菌沙门氏菌和弗氏柠檬酸杆菌质谱图相似,很难区分开来。 3.加标水样的检测和金黄色葡萄球菌样品的检测。对部分细菌进行了加标水样的检测,检测结果显示细菌加标在水中经24小时和30天后,可以实现质谱图的重现性,结果提示用保存的菌种建立的细菌库可以用于环境样品的检测。对临床分离的经生化反应鉴定的40株葡萄球菌样品进行MALDI-TOF-MS检测,检测结果与生化反应结果一致,可以实现属、种的鉴定。 4.MALDI-TOF-MS用于区分MRSA和MSSA的初步研究。对临床分离的34株金黄色葡萄球菌应用纸片扩散法测定其耐药性,其中耐药株(MRSA)11株、敏感株(MSSA)23株。应用MALDI-TOF-MS对这34株金黄色葡萄球菌进行检测,可以将MRSA和MSSA完全区分开来,提示MALDI-TOF-MS可以用于细菌耐药性的研究和检测。
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