【摘 要】
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目前恶性肿瘤已超过心脑血管类疾病成为首位人类致死性疾病,采用Vero细胞培养技术生产的重组溶瘤性Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)具有良好的溶源性、靶向性和安全性,具有重要的应
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目前恶性肿瘤已超过心脑血管类疾病成为首位人类致死性疾病,采用Vero细胞培养技术生产的重组溶瘤性Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)具有良好的溶源性、靶向性和安全性,具有重要的应用价值。本文首先以DMEM/F12培养基为基础,开发了适于Vero细胞生长的廉价VD-LSM低血清培养基(1%NBCS),在T-25方瓶培养中细胞的最高密度达1.75×106cells/ml,可连续稳定传代30次。对Vero细胞在VD-LSM低血清培养基(1%NBCS)中的反应器批培养代谢进行了分析,在此基础上建立了反应器流加补料培养工艺,最大活细胞密度达到4.06×106cells/ml,高于批培养的2.82×106cells/ml。Vero细胞可在Cytodex1上依靠新老微载体间形成的细胞桥进行转移,本文对Vero细胞的球转球放大培养工艺进行了研究。工艺参数优化如下：接种密度以约30cells/MC为佳；培养至60h进行转移,即当转移时的细胞密度达到与初始接种相同的密度时进行转移；静止时间／搅拌时间控制为42min/3min最佳。以1：4(V：V)的比例进行放大,可实现4次连续转移,细胞密度达6.0×106cells/ml以上在前述Vero细胞低血清微载体悬浮培养的基础上,本文对以Vero细胞为基质的HSV-Ⅱ病毒培养工艺进行了研究。结果显示：MOI0.03, TOI36h, pH7.14, T32℃进行病毒培养,96h收毒为最佳的培养条件。初步建立了5L生物反应器病毒培养工艺,滴度达到5.6units/100μl以上
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