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目的将二氧化硅混悬液灌注在大鼠肺内构建大鼠的矽肺模型,并以细胞染尘的方式建立细胞损伤模型,探讨:1 ATG4D在矽肺大鼠肺组织和染尘后肺泡巨噬细胞（NR8383）中的表达水平;2 RNA干扰ATG4D表达后,对染尘后肺泡巨噬细胞自噬流的影响。方法1模型制备及分组:（1）实验动物分组及建立矽肺大鼠模型:40只SPF级饲养SD雄性大鼠（7周,体质量190220g）随机分为两组:对照组、矽肺模型组,每组20只。矽肺模型组采用一次性非暴露式气管插管,灌注1ml的灭菌NaCl溶液与SiO2粉尘混悬液（50mg/ml）;而对照组则只灌注1ml的灭菌NaCl溶液。分别于造模后3d、7d、14d、28d留取肺组织。（2）细胞实验分为4组:对照组:常规培养细胞;SiO2组:培养基中加入SiO2混悬液（50mg/L）;siRNA ATG4D组:培养基中加入siRNA ATG4D,再加入SiO2混悬液（50mg/L）;阴性对照组:培养基中加入siRNA NC,再加入SiO2混悬液（50mg/L）。各组细胞完成相应的操作之后分为6h、12h、24h、48h四个时间点获取细胞。2检测指标及方法:（1）HE染色观察肺组织和NR8383细胞的形态;（2）Real-time PCR和Western blot检测矽肺大鼠肺组织及染尘后NR8383细胞中ATG4D的表达;（3）Western blot筛选转染效率最高的siRNA,Real-time PCR和Western blot检测siRNA转染NR8383细胞后ATG4D的表达情况;（4）CCK-8试剂盒检测四组细胞在各个时间点的增殖情况;（5）酶联免疫吸附实验（ELISA）检测TNF-α和IL-1β的表达水平;（6）采用免疫细胞化学法检测LC-3、Beclin-1与P62的表达与分布情况;（7）Western blot法检测LC-3、Beclin-1、P62的蛋白表达量。3定量测定及统计学分析:应用Rotor-Gene 6.0.14软件,采用相对定量法Comparative Delta-delta Ct分析Real-time PCR结果;使用Image J医学图像分析软件对蛋白特异性反应的条带进行半定量分析,测出光密度值（OD值）,以目标蛋白比内参得到的OD值为蛋白表达量。所得数据用SPSS 23.0统计学软件采用完全随机设计的单因素方差分析,两组间比较选择q检验,如果P<0.05则表示具有显著差异。结果1肺组织形态学观察结果:对照组见肺泡结构清晰,肺泡壁薄,肺间质未见明显炎细胞浸润。矽肺模型组肺泡结构严重破坏,肺泡间隔增宽,肺间质炎症细胞浸润,充血、水肿,实变。2 NR8383细胞的形态学观察结果:对照组NR8383细胞呈圆形或椭圆形,胞核居中,胞质丰富,结构清楚;SiO2组与对照组相比,NR8383细胞体积增大呈不规则形,细胞核出现偏位,胞质疏松丰富,部分细胞质内可见硅尘颗粒。3 Real-time PCR检测结果:与对照组相比,矽肺大鼠肺组织中ATG4D的表达随着时间的延长逐渐升高,14d达到最高,28d出现下降（P<0.05）,染尘后大鼠肺泡巨噬细胞中ATG4D的表达趋势和肺组织一致。Western blot筛选出转染效率最高的为siRNA-2,用于后续实验。siRNA转染NR8383细胞后,ATG4D干预组中ATG4D的表达随着培养时间延长逐渐下降。蛋白表达结果和Real-time PCR结果一致。4 CCK-8细胞增殖检测结果:对照组随着培养时间的增加NR8383细胞增殖明显增多;SiO2组和siRNA ATG4D组细胞的增殖水平低于对照组,但是两组之间细胞增殖情况无明显差异（P>0.05）。5 ELISA检测TNF-α、IL-1β的表达结果:随着时间的增加染尘细胞中TNF-α、IL-1β的表达含量逐渐升高,48h达到最高,但是24h和48h表达含量差异不显著,24h细胞状态比48h好,所以最佳染尘时间为24h。6免疫细胞化学的检测结果显示:LC-3、Beclin1蛋白的阳性表达位置均在细胞质,对照组表达情况十分微弱;与对照组相比,SiO2组细胞体积增大,还有的出现毛刺样突起,阳性表达增强;与SiO2组相比,siRNA ATG4D组结构及轮廓较清晰,阳性表达有所下降。P62蛋白的阳性表达同样位于细胞质,对照组阳性表达较强;SiO2组与对照组相比,阳性表达降低,胞浆呈现淡棕黄色;siRNA ATG4D组与SiO2组相比,阳性表达增强,胞浆出现淡棕褐色,但是仍低于对照组的阳性表达。7 Western blot检测结果:在对照组中LC-3、Beclin1蛋白表达微弱;与对照组相比SiO2组LC-3、Beclin1蛋白表达量最高（P<0.05）,6h开始升高,24h达到高峰,48h稍有回落;siRNA ATG4D组与SiO2组相比,蛋白表达水平下降（P<0.05）,但是基本趋势没变;对照组中P62蛋白的表达较强,与对照组相比SiO2组蛋白表达量6h有所降低,24h降到最低,48h稍微回升（P<0.05）;siRNA ATG4D组蛋白表达量比SiO2组更强（P<0.05）,但是低于对照组。结论ATG4D在矽肺大鼠肺组织和染尘后大鼠肺泡巨噬细胞中呈现显著的高表达,说明矽肺的发病过程中自噬被激活,沉默ATG4D可以抑制自噬流、抑制炎症反应,进而抑制矽肺纤维化的进程,提示ATG4D是治疗矽肺的靶标基因。图29幅;表16个;参93篇。