CVA10候选疫苗株的分离鉴定及免疫原和免疫保护性研究及ICR乳鼠模型的建立

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:roseis
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目的:柯萨奇病毒A组10型病毒(Coxsackievirus A10,CVA10)是近年来手足口病流行爆发的病原体之一,通过分离鉴定筛选合格的CVA10疫苗株,对其进行评价以及通过建立乳鼠模型评价候选疫苗株,对乳鼠模型的免疫学、病理学等初步的探究,以此来控制手足口病的流行。方法:(1)本研究从北京市儿童医院、军事医学研究院、北京市疾控中心共收集80个手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿的标本,通过vero细胞培养法,RT-PCR的方法分离鉴定;(2)经过病毒的蚀斑纯化,得到单克隆病毒株,将病毒与AL(OH)3(0.5g/ml)佐剂混合乳化后制备原疫苗,免疫Balb/c小鼠,收集血清。应用交叉中和实验及阳转率实验筛选CVA10候选疫苗株。用不同的病毒的半数致死量(median lethal dose,LD50)免疫不同日龄的ICR乳鼠,建立CVA10的乳鼠模型,并记录乳鼠的体重变化,临床健康评分,以及存活率。同时做乳鼠器官的病理分析,检测血清中炎性细胞因子的变化。结果:(1)从北京市儿童医院和军事医学研究院共分离出6株CVA10,从北京市疾控中心分离出8株CVA10,还包括3株EV71病毒,3株CVA16病毒,2株CVA6病毒。14株CVA10病毒做交叉中和实验筛选得到4株高效价的中和抗体。通过阳转率实验最后筛选T9株为候选疫苗株;(2)用CVA10的攻毒株腹腔注射1-14日龄的ICR新生乳鼠,可致7日龄的乳鼠发病及死亡,测定病毒的PFU为4.2×10-6/ml。取濒死状态的乳鼠做病理检测,脑组织及肌肉组织中有淋巴细胞的浸润。检测乳鼠血清中细胞因子的含量,发现IL-6,IL-10,TNF-α,MIP1-α都有所增高,但是IL-6增高的幅度最明显。结论:本研究成功筛选到CVA10候选疫苗株,并建立了合格的病毒种子库;筛选出T7病毒株成功建立了CVA10ICR乳鼠模型,为以后CVA10疫苗的研究打下了坚实的基础。
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