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目的利用定量蛋白质组学技术,以乳腺癌细胞系BT-20为细胞模型,探讨NUP88基因的表达变化对BT-20细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭方面的影响,揭示NUP88在乳腺癌发生发展过程中的生物学意义。方法构建NUP88重组慢病毒载体以及NUP88 RNA干扰的病毒载体,分别转染乳腺癌BT-20细胞系,获得NUP88过表达BT-20稳转细胞系以及NUP88敲低表达BT-20细胞系,同时建立对照细胞系。qPCR和western blot分别验证NUP88过表达和敲低表达的效果。通过CCK-8检测四组BT-20细胞的增殖情况,通过流式双染检测敲低组两组细胞的凋亡情况。划痕实验检测敲低组两组细胞的迁移能力,通过transwell实验检测敲低组两组细胞的侵袭能力。通过western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白表达变化。通过flow 3-AM联合流式细胞仪检测敲低组两组细胞的胞内的钙离子水平。通过明胶酶谱实验检测敲低组两组细胞分泌的MMP2、MMP9的活性。通过定量蛋白质组技术分析敲低NUP88后细胞蛋白水平的变化,同时验证NUP88的过表达及敲低情况,分析敲低NUP88对细胞信号通路的影响。结果过表达NUP88基因,细胞增殖能力显著高于空载对照组细胞,而细胞凋亡率显著降低。敲低表达NUP88基因,细胞增殖能力显著低于阴性对照组,而细胞凋亡率显著升高。划痕实验结果表明,NUP88基因敲低表达后,乳腺癌BT-20细胞的迁移能力显著减弱。Transwell实验结果表明,敲低NUP88基因后,BT-20细胞的侵袭能力同样减弱。定量蛋白质组学找到敲低表达后的差异蛋白247个(上调蛋白69个,下调蛋白178个)。质谱结果显示,敲低NUP88基因的表达,蛋白水平降低约0.48倍,与western blot结果基本一致。GO基因聚类分析提示,差异蛋白可能与细胞凋亡途径、细胞粘附等功能相关,特别是钙结合蛋白下调表达。Fluo3-AM结合流式细胞仪检测胞内钙离子含量,敲低NUP88的乳腺癌BT-20细胞中,钙离子含量显著降低。Western blot的结果表明,敲低表达NUP88后,Bax蛋白表达量显著增加,而bcl-2蛋白表达量显著降低,Bax/bcl-2比例明显增加,这可能使肿瘤细胞的凋亡率升高,这与细胞凋亡升高的表型一致。明胶酶谱实验结果表明,敲低NUP88的表达,细胞分泌MMP2和MMP9的活性受到抑制,可能与胞内的钙离子含量显著降低有关,而钙离子的表达水平与基质金属蛋白酶的活性成正相关。结论NUP88基因的表达水平影响乳腺癌细胞的生长、迁移、侵袭等生物学过程。调控NUP88的表达对于乳腺癌的临床靶向治疗具有重要意义。