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背景与目的:肺癌是我国最常见恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）约占80%。近年来随着分子病理学的兴起,对肺癌发生分子机制认识的深入,针对特异靶点的分子靶向药物治疗已成为肿瘤治疗研究的热点。人们在应用针对EGFR（epidermal growth factor receptor）突变分子靶向药物治疗NSCLC取得成功后,又发现ALK、ROS1、RET等基因致癌性驱动变异。棘皮动物微管蛋白4（echinoderm microtubule associaed protein-like 4,EML4）与间变淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase,ALK）基因融合形成的EML4-ALK融合基因,作为ALK基因重排的主要类型,在部分NSCLC的发生和演进中发挥着驱动作用。正常情况下,EML4和ALK基因编码产物仅表达于成人神经系统,EML4蛋白与细胞稳定微管蛋白、调节有丝分裂及维持存活等功能密切相关,ALK蛋白则在维持、调节神经系统活性及发育过程中发挥重要作用。病理条件下,如两者发生异常融合,EML4蛋白作为融合伴侣能通过二聚化作用激活ALK蛋白胞内激酶域,驱动细胞恶性转化。目前,临床上对检测ALK基因重排应用较广的方法主要是免疫组织化学法（Immunohistochemical Technology,IHC）,但该方法主要聚焦于检测ALK蛋白,忽略了对其有激活作用的伴侣蛋白EML4的检测,而不同分子伴侣融合类型ALK蛋白NSCLC的病理临床特点及潜在治疗靶点可能存在差异。了解携带EML4-ALK这种主要融合类型NSCLC的临床病理特点可能对这部分患者肿瘤靶向药物治疗选择及预后评估有所帮助。国内外相关研究报道及本课题组前期工作均提示携带EML4-ALK融合基因NSCLC常有腺泡样结构,且产生黏液,黏液蛋白分泌是这一类型NSCLC的生物学特性之一。癌胚抗原（Carcinembryonic Antigen,CEA）和黏蛋白MUC1是在肺腺癌中较常出现的两种黏蛋白,了解这两种黏蛋白能否作为携带EML4-ALK融合基因NSCLC的分子标志值得探索。本研究通过引入对EML4蛋白的检测,根据EML4蛋白和ALK蛋白的表达情况,具体分析其表达与患者临床病理的关系,并进一步探讨了携带EML4-ALK融合基因NSCLC中黏蛋白CEA和MUC1的表达情况,以期为今后快速简便且有针对性的筛选出携带该融合基因的NSCLC患者,确定分子靶向治疗方案提供临床依据。方法:收集2007-2009年来自大连医科大学附属医院手术切除且诊断明确的非小细胞肺癌标本127例,记录其临床病理情况。免疫组织化学法检测NSCLC肿瘤细胞融合基因相关蛋白EML4、ALK和黏蛋白CEA、MUC1表达。利用SPSS17.0软件分析了NSCLC组织EML4和ALK蛋白的表达情况、相互关系以及它们的表达与患者临床病理的关系;同时分析黏蛋白CEA和MUC1表达与NSCLC患者临床病理特征及与NSCLC组织EML4、ALK蛋白表达关系。结果:1、NSCLC组织EML4、ALK蛋白表达及其与患者临床病理的关系1)NSCLC组织EML4蛋白和ALK蛋白表达阳性率分别为51.97%（66/127）和32.28%（41/127）;EML4与ALK蛋白表达双阳性率为26.77%（34/127）。2)NSCLC组织ALK蛋白表达阳性率在EML4蛋白阳性组和阴性组分别为51.52%（34/66）和11.50%（7/61）,差异有显著性意义（P=0.000）。EML4和ALK蛋白表达均阳性者34例,均阴性者54例,EML4蛋白阳性而ALK蛋白阴性者32例,EML4蛋白阴性表达而ALK蛋白阳性者7例,两蛋白表达显著正相关（P=0.000,r=0.496）。3)NSCLC组织EML4蛋白表达阳性率在男性患者与女性患者分别为44.73%（34/76）与62.75%（32/51）,差异有显著性意义（P=0.046）;在腺癌与鳞癌分别为65%（52/80）与30.77%（12/39）,差异有显著性意义（P=0.000）;但其表达不受患者年龄、吸烟史、淋巴结转移、病理分期、肿瘤分化程度等因素影响（P＞0.05）。NSCLC组织ALK蛋白表达阳性率在男性患者与女性患者分别为18.42%（14/76）与52.94%（27/51）,差异有显著性意义（P=0.000）;在吸烟患者与不吸烟患者分别为19.15%（9/47）与40%（32/80）,差异有显著性意义（P=0.015）;在腺癌与鳞癌分别为41.25%（33/80）与15.38%（6/39）,差异有显著性意义（P=0.005）;但其表达不受患者年龄、淋巴结转移、病理分期、肿瘤分化程度等因素影响（P＞0.05）。NSCLC组织EML4与ALK蛋白表达双阳性率在男性患者与女性患者分别为15.78%（12/76）与43.14%（22/51）,差异有显著性意义（P=0.001）;在吸烟患者与不吸烟患者分别为14.89%（7/47）与33.75%（27/80）,差异有显著性意义（P=0.020）;在腺癌与鳞癌分别为36.25%（29/80）与10.26%（4/39）,差异有显著性意义（P=0.003）;但其表达不受患者性别、年龄、淋巴结转移、病理分期、肿瘤分化程度等因素影响（P＞0.05）。2、NSCLC组织的黏蛋白CEA和MUC1表达及其与患者临床病理的关系1)NSCLC组织黏蛋白CEA和MUC1阳性率分别为89.76%（114/127）和73.23%（93/127）。2)NSCLC组织MUC1表达阳性率在CEA阳性组和阴性组分别为76.32%（87/114）和46.15%（6/13）,差异有显著性意义（P=0.020）。CEA和MUC1表达均阳性者87例,均阴性者7例,CEA阳性而MUC1阴性者27例,CEA阴性而MUC1阳性者6例,两蛋白表达显著正相关（P=0.000,r=0.477）。3)NSCLC组织CEA表达阳性率在腺癌与鳞癌分别为98.75%（79/80）与76.92%（30/39）,差异有显著性意义（P=0.000）;MUC1阳性率在腺癌与鳞癌分别为87.50%（70/80）与48.72%（19/39）,差异有显著性意义（P=0.000）;两者表达均不受患者性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、病理分期、肿瘤组织类型、肿瘤分化程度等因素影响（P＞0.05）。3、NSCLC组织融合基因相关蛋白EML4、ALK与黏蛋白CEA及MUC1表达的相关性分析1)NSCLC组织EML4蛋白和CEA表达均阳性者63例,均阴性者10例,EML4蛋白阳性而CEA蛋白阴性者3例,EML4蛋白阴性而CEA阳性者51例,两蛋白表达显著正相关（P=0.000,r=0.315）。NSCLC组织EML4蛋白和MUC1表达均阳性者56例,均阴性者24例,EML4蛋白阳性而MUC1阴性者10例,EML4蛋白阴性而MUC1阳性者37例,两蛋白表达显著正相关（P=0.000,r=0.364）。2)NSCLC组织ALK蛋白和CEA表达均阳性者39例,均阴性者11例,ALK蛋白阳性而CEA阴性者2例,ALK蛋白阴性而CEA阳性者75例,两蛋白无相关关系（P=0.052,r=0.173）。NSCLC组织ALK蛋白和MUC1表达均阳性者34例,均阴性者27例,ALK蛋白阳性而MUC1阴性者7例,ALK蛋白阴性而MUC1阳性者59例,两蛋白表达显著正相关（P=0.003,r=0.264）。3)NSCLC组织EML4、ALK双阳性34例中CEA阳性者33例,EML4、ALK非双阳性93例中CEA阳性者81例,EML4、ALK共表达和CEA表达显著正相关（P=0.005,r=0.250）。NSCLC组织EML4、ALK双阳性34例中MUC1阳性者31例,EML4、ALK非双阳性93例中MUC1阳性者62例,EML4、ALK共表达和MUC1表达显著正相关（P=0.000,r=0.340）。4、ALK蛋白阳性与阴性表达NSCLC组织中EML4蛋白与黏蛋白CEA及MUC1的关系1)ALK阳性的NSCLC组织EML4蛋白表达阳性组和阴性组中CEA蛋白阳性率分别为97.06%（33/34）与85.71%（6/7）,差异无显著性意义（P=0.316）;MUC1蛋白阳性率分别为91.18%（31/34）与42.86%（3/7）,差异有显著性意义（P=0.011）。2)ALK阴性的NSCLC组织EML4蛋白表达阳性组和阴性组中CEA蛋白阳性率分别为93.75%（30/32）与83.33%（45/54）,差异无显著性意义（P=0.287）;MUC1蛋白阳性率分别为78.13%（25/32）与42.86%（34/54）,差异无显著性意义（P=0.143）。结论:1、表达ALK蛋白的NSCLC常表达EML4蛋白,EML4蛋白是NSCLC中ALK蛋白激活的主要因素。2、不吸烟的女性患者组织类型为腺癌的NSCLC易出现EML4-ALK融合蛋白表达,但EML4蛋白表达不受吸烟因素影响。3、表达CEA的肺腺癌常同时表达黏蛋白MUC1。4、黏蛋白MUC1常表达于携带EML4-ALK融合基因的NSCLC,其表达可作为由EML4激活型ALK蛋白表达NSCLC的分子标志。