细脚拟青霉(Paecilomyces tenuipes)是高雄山虫草的无性型,其有效成分与天然冬虫夏草类似,在国外已将其作为冬虫夏草的替代品使用。同时,细脚拟青霉作为我国一种著名的虫生药用真菌,几千年来在亚洲被用为药物。近年来,随着人们保健意识逐渐增强,导致冬虫夏草需求量急剧增加,加之盲目的采挖,冬虫夏草资源已濒临灭绝。因此,开展细脚拟青霉的研究对于缓解冬虫夏草资源匮乏所带来的压力、满足人们日益增长的需求是极为重要的。氧化应激是指机体内氧化-还原系统失衡,产生的过多氧自由基不能被消除,氧化系统与抗氧化系统的失衡会引起细胞或组织损伤,甚至加速各种疾病的发生。随着生活方式的改变、生活节奏的加快和和环境的污染,氧化应激诱发的疾病,如疲劳、抑郁症、免疫缺陷和糖尿病的发病率逐渐增加,严重影响了人们的身体健康、生活质量和生存寿命。因此,开发抑制氧化应激的相关产品,治疗或辅助治疗氧化应激诱发的疾病是非常重要和必要的。细脚拟青霉具有多种生物学活性,虽然目前有关于细脚拟青霉的活性报道,但研究并不深入,作用机制也较为模糊,有待于更多系统的研究。本文以氧化应激为中心,开展细脚拟青霉对氧化应激诱发疾病的活性研究,考察细脚拟青霉药理活性的同时,阐述与药效相关的作用机制,为细脚拟青霉进一步地开发利用提供理论基础。同时,通过围绕氧化应激对细脚拟青霉的药效活性及可能机制进行研究,为虫生真菌的研究开发提供新的思路。在细脚拟青霉菌丝体水提物(PTNE)介导的抗疲劳活性研究中,以小鼠为研究对象,对小鼠口服灌胃给予PTNE 2周后,通过跑步实验、疲劳转棒实验和负重游泳实验发现PTNE可以显著延长小鼠的运动时间,提高小鼠的运动能力。同时,与空白组相比,PTNE还可以提高小鼠血清和肝脏中ATP的含量、抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性,并且降低LA、LDH、MDA和ROS的含量。结果表明,PTNE可以通过提高小鼠的运动能力,延长小鼠的运动时间,同时增强抗氧化酶的表达,减少氧自由基的积累,减轻或抑制氧化应激,从而提高小鼠体内能量供给能力,进而表现出抗疲劳活性。PTNE具有多种生物学活性,包括抗抑郁活性。在本研究中,通过建立慢性不可预见应激抑郁大鼠模型,抑郁大鼠连续4周灌胃给予3 mg/kg百忧解(Flu)和0.04、0.2、1 g/kg PTNE进行治疗后,对PTNE的抗抑郁活性进行研究,测量血液和下丘脑中神经递质和激素的水平。PTNE明显提高了抑郁大鼠在跑步实验中力竭时间,同时显著降低了在热板实验中的热缩足潜伏期及强迫游泳中的不动时间。同时,PTNE将抑郁大鼠血液和下丘脑中的神经递质和激素含量恢复至正常标准,而且抑郁HPA轴的活性升高。此外,PTNE提升抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性、减少脂质过氧化物的表达,提高抑郁大鼠的抗氧化水平。综上所述,PTNE可能通过改善抑郁大鼠血液和下丘脑中激素和神经递质的水平并提高抑郁大鼠的抗氧化能力,发挥较好的抗抑郁活性,可以作为抑郁症治疗的辅助药物。在PTNE介导的免疫调节活性中,考察PTNE对小鼠免疫力的影响。采用腹腔注射CTX方法建立免疫抑制小鼠模型,对小鼠口服给予2周PTNE,给药剂量分别为0.04、0.2、2.0 g/kg,与模型组相比,PTNE有效改善小鼠体重,脏器指数变化,增加小鼠NK细胞毒性及淋巴细胞增殖系数,证明其对小鼠免疫机能具有很好的增强作用。另外,PTNE显著提高免疫抑制小鼠血清和脾脏中Ig G、Ig A、Ig M、IFN-γ的水平,调节白细胞介素和肿瘤坏死因子-α的分泌,增强小鼠免疫力。进一步研究发现,PTNE显著升高免疫抑制小鼠血清和脾脏中i NOS和抗氧化酶的活性。因此,本实验推测PTNE通过改善免疫抑制小鼠血清和脾脏中免疫球蛋白及细胞因子的水平,抑制氧化应激,保护免疫器官,增强小鼠的免疫功能。在本实验中,采用高糖高脂饮料喂养联合STZ注射建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型对PTNE降血糖、降血脂和治疗糖尿病肾病活性进行研究,对糖尿病大鼠连续4周灌胃给予120 mg/kg二甲双胍和0.04、0.2、1 g/kg PTNE进行治疗。PTNE的降血糖活性通过检测糖尿病大鼠血糖和口服糖耐量实验进行确定。PTNE不仅降低了糖尿病大鼠的血糖水平,同时改善了糖尿病大鼠的葡萄糖耐受。同时,PTNE降低了糖尿病大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的含量,同时升高了高密度脂蛋白的水平。而且,PTNE也降低了糖尿病大鼠血清中肌酐、尿素氮、白介素-2、6和NF-κB的含量,对糖尿病肾病起到了治疗作用。PTNE对超氧化物歧化酶,丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶的影响,说明在Ⅱ型糖尿病大鼠体内PTNE的降血糖、降血脂和治疗糖尿病肾病活性与减轻机体内氧化应激水平有关。