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[目的]胸腹水是恶性肿瘤患者,尤其是晚期肿瘤患者的常见体征。目前主要通过引流以及腔内灌注化疗等缓解症状,甚至清除恶性胸腹水。恶性胸腹水的成分复杂,除了肿瘤细胞外,还包括免疫细胞、内皮细胞、红细胞和成纤维细胞,以及大量的蛋白质、氨基酸、脂类、糖、电解质等。从构成成分来讲,恶性胸腹水类似于肿瘤微环境,是研究肿瘤微环境较好的临床取材来源。本研究着眼于证实恶性胸腹水中存在间充质干细胞并揭示间充质干细胞对胸腹水中肿瘤细胞的作用及其机制,以开发基于间充质干细胞的疗法来进一步改善恶性胸腹水的治疗效果。[方法]第一部分：免疫磁珠分选恶性胸腹水中CD45阴性CD90阳性的细胞行流式检测间充质干细胞表面标记分子(CD45, CD73, CD90, CD105, CD44, CD29, CD33, CD34, CD326, CD133, CDllb, HLA-DR等)的表达情况。同时,将CD45阴性CD90阳性细胞接种培养,观察其贴壁情况、形态；传代细胞行间充质干细胞相关的诱导分化实验。第二部分：观察CD45阴性细胞的培养状况并将恶性胸腹水中的CD45阴性细胞直接流式抗体染色,观察CD45阴性细胞在胸腹水中直接作用的形式。通过Transwell体系观察肿瘤细胞对培养的CD45阴性CD90阳性的趋化作用。RT-PCR和ELISA检测相关细胞因子及受体的表达并通过特异性的细胞因子中和抗体和细胞因子受体阻断性抗体来干扰肿瘤细胞对CD45阴性CD90阳性细胞的趋化作用。第三部分：将间充质干细胞的上清培养肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的密度以及流式检测肿瘤细胞的增殖指标(Ki-67和染CFSE后的平均荧光强度值),同时RT-PCI(?)检测肿瘤细胞生长因子及其受体mRNA的转录水平；将肿瘤细胞上清培养间充质干细胞,观察间充质干细胞的密度以及流式检测间充质干细胞的增殖指标(Ki-67等),并同时RT-PCI(?)检测间充质干细胞生长因子及其受体mRNA转录。[结果]从恶性胸腹水中免疫磁珠分选的CD45阴性CD90阳性细胞贴壁生长,培养半个月后呈长梭形,表达间充质干细胞的一组表面抗原分子(CD73、CD90、CD44、CD29等)且能够分化成脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞。进一步,培养的CD45阴性细胞和恶性胸腹水中CD45阴性CD90阳性间充质干细胞与CD45阴性CD90阴性肿瘤细胞相互作用形成花环样结构。在Transwell体系中,下室的肿瘤细胞能够趋化上室的间充质干细胞且CCL2-CCR2为趋化作用途径之一。最后,间充质干细胞可以促进肿瘤细胞增殖；反过来,肿瘤细胞也可以促进间充质干细胞增殖。RT-PCR检测发现间充质干细胞可诱导肿瘤细胞转录IL-1b而肿瘤细胞可诱导间充质干细胞稍上调表达EGF和EGFR。[结论]恶性胸腹水中存在一定比例的间充质干细胞且肿瘤细胞至少可通过CCL2-CCR2途径趋化间充质干细胞。另外,恶性胸腹水来源的间充质干细胞与肿瘤细胞可相互促进各自的生长,其可能的机制为生长因子信号通路(如HGF/IGF/VEGF-EGFR等)。