酸枣仁皂苷A引起的肠道和主要脏腑之间的信息交流

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酸枣仁作为国家颁布的第一批药食同源食品之一,具有养心补肝,宁心安神,敛汗,生津的功效,主要用于治疗虚烦不眠,惊悸多梦、体虚多汗,津伤口渴等症。酸枣仁皂苷A是酸枣仁镇静催眠的主要活性成分,其作用机理尚待进一步研究。肠道是人体的一个重要器官,研究表明其含有多种受体并可分泌多种细胞因子,在调节机体的免疫及信息传递中发挥重要的生理作用。本文研究了酸枣仁皂苷A在体内各个组织中的分布情况,考察了酸枣仁皂苷A对于大鼠海马细胞GABA受体表达的影响,并利用细胞因子来探讨肠道与各个脏腑之间的信号交流关系,为更好、更全面、更准确的研究酸枣仁皂苷A镇静催眠作用机理提供依据,主要研究结果如下:应用液质联用技术(HPLC-MS/MS)测定大鼠血浆及心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、肠组织中酸枣仁皂苷A的含量,确定药物在大鼠体内主要组织中的分布情况。结果表明,2mg/kg的剂量对大鼠静脉注射后,酸枣仁皂苷A在体内迅速分布,各个组织中的酸枣仁皂苷A在20-2000ng/mL浓度范围内线性关系均良好,r>0.9990,提取回收率>80%。精密度均小于15%,可于体内组织分布的测定。经过检测酸枣仁皂苷A在肠组织中的药物浓度最高(2930.20±518.96ng/mL),脑组织中最少(144.27±22.31ng/mL),依次分布情况:肾脏>脾脏>肝脏>肺>胃>心脏>肌肉。组织中的药物浓度均随时间的延长而降低,在体内未见有明显的特殊积蓄现象,药物在检测时间内于4h时降至较低水平。以神经元微管蛋白-2(MAP-2)作为神经细胞标志物,运用免疫荧光技术对体外元代培养的海马细胞进行纯度鉴别。以海马细胞作为模型,通过用高、中、低三种不同浓度的酸枣仁皂苷A作用海马细胞,以细胞存活率为考察指标,考察酸枣仁皂苷A对海马细胞的生长作用。结果表明,海马细胞呈绿色荧光且特征明显,纯度较好。不同浓度酸枣仁皂苷A(0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)作用海马细胞24h后,与空白对照组相比,低、中、高三个剂量的酸枣仁皂苷A的细胞存活率均大于100%,25μg/mL组P>0.05,50μg/mL和100μg/mL组P<0.05,有显著差异,证明在在该浓度下的酸枣仁皂苷A具有促进海马细胞生长的作用。利用荧光定量PCR技术,考察枣仁皂苷A对于SD大鼠海马细胞GABA受体mRNA表达的影响。与空白对照组比较酸枣仁皂苷A作用细胞48h后,25μg/mL组GABAAα1、GABAAα5、GABABR1受体mRNA(relative to β-Actin)表达量显著升高(P<0.05),GABAAβ1表达量降低(P <0.05)。50μg/mL和100μg/mL组GABAAα1、GABABR1、GABAAα5和GABAAβ1受体mRNA表达量均显著升高(P<0.05),不同浓度同一受体的基因表达量但之间存在一定的剂量相关性。与药物作用48h相比,50μg/mL的酸枣仁皂苷A作用海马细胞24h后,GABAAα1受体mRNA表达量升高(P<0.01),GABABR1、GABAAα5表达量降低(P<0.05),均具有显著性。GABAAα1和GABAAβ1受体mRNA的表达量趋势相同。然而,GABABR1、GABAAα5受体mRNA的表达量是随药物作用时间的延长而升高,显示出一定的时效关系。酸枣仁皂苷A和地西泮分别作用海马细胞24h,其受体基因表达水平高于地西泮,酸枣仁皂苷A可能在发挥镇镇静催眠作用时较地西泮更加迅速有效。用液体芯片技术对细胞因子进行检测,考察肠道与脏腑之间的信息交流关系。实验中通过对细胞因子的检测,寻找细胞因子的表达分泌细胞和靶细胞,根据其相互作用关系做出细胞和细胞之间的作用关系表,以此表绘制出细胞通讯网络图,从而直观地显示出肠道与脏腑之间的关系。实验结果表明,肠道在受到酸枣仁皂苷A刺激后,会在空白培养上清液中分泌细胞因子,继而这些释放在培养液中的细胞因子(经循环系统)传递到其他脏腑组织调节相应细胞因子的表达和分泌,并通过计算得到肠道对各个脏腑组织作用的强弱关系为:心>脾>脑>肝>肺>胃>肾。细胞因子是肠道和脏腑发生联系的重要信号分子,通过分析细胞因子来建立细胞通讯网络,为探讨肠道与脏腑之间进行通讯联系提供了一种新方法和有力手段。
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