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浒苔(Enteromorphα)是一种重要的经济海藻,具有食用和药用价值。本文以青岛海域浒苔为原料,对浒苔多糖的酶法提取、分离纯化和结构分析进行了系统研究。
1、比较了不同脱脂溶剂的脱脂效果,结果表明95%的乙醇脱脂效果最好。通过不同提取方法的浒苔多糖得率比较,最终选择热水浸提法和热水-木瓜蛋白酶法进行研究。
2、确立了热水浸提浒苔多糖的提取分离工艺,优化了提取分离工艺参数,确定了含量分析方法。通过单因素试验和正交试验得到浒苔多糖的最佳提取工艺为:提取温度80℃,时间4h,料液比1∶50,提取2次,得到粗多糖纯度为46.29%,浒苔多糖得率为22.53%,蛋白含量0.86%。
3、确立了热水-木瓜蛋白酶联用法提取浒苔多糖的提取分离工艺,通过单因素试验和正交试验得到的最佳提取工艺条件为:木瓜蛋白酶用量8%,酶解温度60℃,酶解3h,料液pH5.5,得到粗多糖纯度为50.03%,浒苔多糖的得率27.75%,蛋白含量为0.78%。热水-木瓜蛋白酶法提取浒苔多糖的效果明显高于热水浸提法。
4、通过活性炭,双氧水对浒苔多糖进行脱色,结果表明:2%的双氧水脱色率高,多糖损失率最低。采用DEAE-52纤维素柱对浒苔多糖组分进行分离,得到4种系列多糖EP1、EP2、EP3和EP4。EP1的产率为73.22%。将EP1进行葡聚糖凝胶SephadexG-100柱层析、透析、冷冻干燥得到得到易溶于热水、不溶于乙醇等有机溶剂的白色粉末状浒苔多糖纯品,多糖回收率为95.35%,纯度为99.69%。
5、利用红外光谱对浒苔多糖纯品进行测定,结果表明具有多糖的特征吸收峰及硫酸基存在。EP1组分在180-640nm波长间扫描,在260nm和280nm未见有核酸和蛋白质的特征吸收峰。
6、采用HPLC法分析浒苔多糖所含的单糖组成,确定色谱条件为:EclipseXDB-C18色谱柱,流动相为0.1mol/L醋酸铵(pH6.7)缓冲液-乙腈(86∶14,v∶v),流速1.0mL/min,检测波长为245nm。EP的单糖组成为:甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶木糖=0.09∶1.0∶3.1∶0.29。