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目的:通过观察养阴清热理气方(H)及各拆方当归、女贞子(Y);天花粉、蚤休(Q);旋复花、八月札(L)对食管癌细胞EC9706增殖抑制和EGFR-PLC-γ1-PKCa信号转导通路的影响,研究养阴、清热、理气法治疗食管癌的机理,探讨阴虚、热毒及气结与食管癌病变和EGFR-PLC-γ1信号转导的关系。
方法:采用人食管癌EC9706细胞为实验对象,用倒置显微镜观察细胞生长状况,计算细胞抑制率,筛选出有效的药物:用正交试验优选出疗效最好的方剂;设对照组和用养阴清热理气方及其养阴、清热、理气三个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察EC9706细胞生长状态改变,用Western blot检测EC9706细胞:EGFR-PLC-γ<,1>-PKCa信号转导通路各蛋白表达的影响。
结果:①养阴清热理气方及各拆方对EC9706细胞增殖明显抑制,对细胞形态作用明显不同,养阴组细胞可见细胞皱缩,透光度减小,形态不规则,细胞间基质呈现丝网状,贴壁性变差;清热组细胞表面逐渐粗糙,继而胞质内充满多量颗粒状物质,然后出现空泡样变化;理气组细胞皱缩,细胞间隙加大,胞质粗糙;全方组及其他拆方组细胞形态与清热组、理气组相似,培养基中可见有较多的细胞碎片。②养阴清热理气方及各拆方均能抑制EC9706细胞的生长,全方作用最强,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量一效应依赖关系。③人食管癌EC9706细胞可检测到EGFR、PLC-γ1、PKCa蛋白分子的过度表达。④当用IC50药物剂量处理细胞时,养阴清热理气方及各拆方均能抑制EGFR-PLCγ1-PKCa信号通路各蛋白表达水平,其作用强弱依次为:H>QL>QY>LY>Y>Q>L。
结论:①养阴清热理气方及各拆方均能明显抑制人食管癌细胞EC9706的生长,全方组效果最好,养阴、清热、理气三法联用具有协同作用。②食管癌发病和EGFR-PLC-γ1-PKCa转导通路信号增强密切相关。③养阴清热理气方及各拆方均能下调EC9706细胞EGFR-PLC-γ1-PKCa信号通路各蛋白表达水平,养阴、清热、理气及其合方抑制食管癌细胞增殖与抑制EGFR-PLC-γ1-PKCa信号转导相关。④通过药效反证,在食管癌病变中,阴虚、热毒、气结与EGFR-PLC-γ1-PKCa信号表达和转导增强密切相关。⑤清热养阴理气是治疗食管癌的有效治疗方法。