内切β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶作为糖苷酶家族的一员,它的主要作用方式是水解糖蛋白糖链上两个N-乙酰葡糖胺之间的β-1,4糖苷键。内切β-N-乙酰氨基葡糖苷酶分别属于GH18家族和GH85家族。由于内切β-N-乙酰氨基葡糖苷酶的去糖基化作用,因此在糖组学和糖生物学的研究中被广泛的使用。本文在苜蓿链霉菌ACCC40021全基因组测序的基础上,通过生物信息学分析,发现了一种新的内切β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因,CAZy表明该酶属于GH18家族一员,通过与文献中已报道β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶氨基酸序列进行同源性分析发现,与GH18家族的EndoFV和EndoT序列的相似性分别为38.19%和38.21%。根据NCBI数据库中已报道的其他内切β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶和其他几丁质酶基因进行同源比较,构建系统进化树,根据结果可知,该酶与球孢子菌属几丁质酶III型亲缘关系最近。根据目的基因序列,构建了以pET30a(+)为载体的重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,成功诱导表达出目的蛋白,通过镍柱纯化后,获得纯的目的蛋白。以RNaseB作为反应底物,我们研究了该酶的酶学性质。该酶比活力为1.0×10~6U/mg,最适反应温度为35℃,在温度30℃-45℃范围内,有较好的热稳定性;最适反应pH为6,在pH值4-8之间,该酶保持有较高的酶活。选用酵母表达的糖基化糖化酶、果胶酶、酸性蛋白酶为底物,确定了能够完全的去糖基化,为糖蛋白糖基化位点研究提供了一种新的工具酶。应用该酶处理奶酪等奶制品加工的副产物乳清蛋白,从中制备寡糖链。在最适条件下,当加酶量为1 mg时,每分钟从每毫升乳清中可获得寡糖链0.95 mg。