【摘 要】
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目的:通过研究ERK1/2信号阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK及其下游基因MMP-9表达的影响,探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用。方法:将处于对数生长期的
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目的:通过研究ERK1/2信号阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK及其下游基因MMP-9表达的影响,探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用。方法:将处于对数生长期的人胃癌MGC-803细胞同步化后分组,即PD98059不同浓度(5、10、25、50、100μmol/L)作用24h,及PD98059 25μmol/L作用于不同时间(2、4、12、24、48h),并将无药物处理组作为空白对照组,将DMSO(25μmol/L)作为阴性对照组,采用:(1)噻唑蓝比色法(MTT)观察胃癌细胞MGC-803增殖情况。选择合适的药物浓度进行下一步实验。(2)蛋白定量研究(Western-blot)法检测P-ERK的蛋白表达即ERK磷酸化程度作为衡量ERK1/2信号转导通路活性指标。(3)半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western-blot法检测RECK和MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结果:(1) MTT法显示:PD98059能够抑制胃癌MGC803细胞增殖,并在12、24和48h作用时间点呈时间依赖性(25μmol/L),在25、50和100μmol/L作用浓度点呈浓度依赖性(24h)。PD98059的有效浓度时是25μmol/L,在此浓度下有效时间为24h。(2) Western-blot法检测结果显示:PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调P- ERK1/2,从而使得ERK1/2信号传导途径失活。(3) RT-PCR法和Western-blot法检测结果显示:PD98059能够浓度依赖性(25-100μmol/L)和时间依赖性(12-48h)刺激培养的胃癌细胞RECK mRNA和蛋白表达增加,MMP-9mRNA和蛋白表达下降。结论:(1) PD98059可以抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖、生长。(2) PD98059可以上调RECK的表达,下调MMP-9的表达,由此可知抑制ERK1/2信号途径可以抑制人胃癌细胞的侵袭转移。
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