多不饱和脂肪酸(PUFAs)在营养和医学领域有着重要作用。目前PUFAs主要从鱼油中提取，工艺复杂，价格昂贵。小球藻中含有丰富的多不饱和脂肪酸，因此利用微藻，尤其是自养小球藻，可以吸收CO2转化生产多不饱和脂肪酸具有广阔的前景。　　本文采用中国淡水藻种库的三株小球藻(藻株1068、270、40)和实验室自行筛选的三株小球藻（藻株WLZ-8、14、24），通过设计L9(34)正交实验（ρNa2CO3、初始pH值、N/P）对培养条件进行优选;培养过程中以碳酸钠为碳源，硝酸钠为氮源，磷酸二氢钾为磷源。通过设计单因素实验（接种量、温度、光照强度、盐度）对影响小球藻自养培养的环境因素进行探索。实验中以小球藻的生物量、生长速率、世代时间、细胞密度为指标，确定最佳培养条件。在优化培养条件下，六株小球藻的12天生物量分别为0.425、0.388、0.275、0.298、0.327、0.303g/L。　　本文利用乙醚-石油醚法对小球藻产物中的多不饱和脂肪酸进行提取，采用酸碱结合甲酯化法对多不饱和脂肪酸进行预处理。为提高测定样品预处理的效率，本文通过设计L9(34)正交实验（ρKOH-甲醇、皂化时间、ρH2SO4-甲、酯化时间）和单因素实验对预处理条件进行优选。最终确定样品预处理的最优条件是ρKOH-甲醇为0.5mol/L，皂化时间为l0min，ρH2SO4-甲醇为5％，酯化时间为8min。测定过程中的RSD为0.7％-3.1％，六株小球藻粉经乙醚-石油醚提取以及甲酯化过程的加标回收率55.5％-82.7％。　　本文建立了多不饱和脂肪酸的GC/MS的定性定量测定方法。经GC/MS对样品进行初步分析确定藻粉中主要产物为C16H30O2、 C18H36O2、 C18H32O2和C18H30O2。其出峰时间依次分别为1595、2024、2045和2100。　　通过加标回收率折算，六株小球藻粉种PUFAs的实际产量分别为10.66mg/g藻粉、20.52mg/g藻粉、10.72mg/g藻粉、11.64mg/g藻粉、26.05mg/g藻粉和12.84mg/g藻粉。其中每克干藻粉中C16H30O2含量最高的为WLZ-14藻株(8.03mg); C18H36O2含量最高的为40藻株(4.51mg); C18H32O2含量最高的为40藻株(6.91mg); C18H30O2含量最高的为270藻株(8.47mg)。